Question

18．尿素是一種重要的農業(yè)肥料，但若不經細菌的分解，就不能更好地被植物利用．土壤中的某些微生物對尿素具有有分解作用，請就圖1所示土壤中的尿素分解菌的分離與計數實驗分析回答．
（1）分析下面培養(yǎng)基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O．若此培養(yǎng)基用于培養(yǎng)分解尿素的細菌，則應除去上述NaNO₃成分，并加入尿素和葡萄糖物質，以補充氮源和碳源．
（2）同學甲一個平板經培養(yǎng)后，發(fā)現培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是菌液濃度過高，應當怎樣操作才可避免此種現象？增大稀釋倍數．同學乙一個平板經培養(yǎng)后的菌落分布如圖2所示．推測該同學接種時可能的操作失誤是涂布不均勻．
（3）四位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中細菌數量．在對應稀釋倍數為10⁵的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計結果，正確可信的是D．
A．一個平板，統(tǒng)計的菌落數是23
B．兩個平板，統(tǒng)計的菌落數是22和26，取平均值24
C．三個平板，統(tǒng)計的菌落數分別是21、5和52，取平均值26
D．四個平板，統(tǒng)計的菌落數分別是21、30、24和25，取平均值25
（4）同學丙在稀釋倍數為10⁵的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數的平均值為23.4，那么每毫升樣品中的菌落數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.2mL）1.17×10⁷．
（5）用這種方法測定密度，實際活菌數量要比測得的數量多，因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落．
（6）同學丁從上圖稀釋10⁵倍的培養(yǎng)基中篩選出150個菌落，遠高于其他同學的結果，如果他們測定的是同一土壤樣品，則可能的原因是選擇培養(yǎng)基被雜菌污染了，請你通過設置對照來確定該原因將同學丁配制的選擇培養(yǎng)基不接種而置于相同環(huán)境下培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否被污染．

Answer 1

分析 本題是對用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、培養(yǎng)液中的成分、常用的接種方法等相關知識的綜合性考查，回憶微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、培養(yǎng)液中的成分、常用的接種方法的具體操作和目的，然后結合問題進行解答．

解答 解：（1）題干所給的培養(yǎng)基配方中缺少碳源，氮源是NaNO₃，若此培養(yǎng)基用于培養(yǎng)分解尿素的細菌，則應該使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，即除去NaNO₃．同時，尿素分解菌屬于異養(yǎng)型生物，培養(yǎng)基配方中應該添加尿素和葡萄糖物質，以補充氮源和碳源．
（2）培養(yǎng)基上的菌落連成一片最可能是菌液濃度過高導致的，應當增大稀釋倍數．由圖2可知，該同學采用的是稀釋涂布平板法，但菌落比較集中，沒有很好的分散開來，可能是涂布不均勻導致的．
（3）A只涂布了一個平板，B只涂布了兩個平板，這兩位同學的實驗數據說服力不夠；C其中一個平板的計數結果與另兩個相差太遠，說明操作過程出現錯誤，數據缺乏真實性，因此正確可信的是D．
（4）在稀釋倍數為10⁵的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數的平均值為23.4，那么每毫升樣品（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.2mL）中的菌落數是=10⁵×23.4×$\frac{1}{0.2}$=1.17×10⁷個．
（5）當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落，因此用這種方法測定得密度偏低．
（6）培養(yǎng)基上有其他雜菌的菌落，可能肯定是該大腸桿菌的品系被污染了，將同學丁配制的選擇培養(yǎng)基不接種而置于相同環(huán)境下培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否被污染．
故答案為：
（1）NaNO₃    尿素和葡萄糖    氮源和碳
（2）菌液濃度過高  增大稀釋倍數  涂布不均勻 
（3）D
（4）1.17×10⁷
（5）多　　當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落 
（6）選擇培養(yǎng)基被雜菌污染了（培養(yǎng)基中混入了其他N源，因而導致不能分解尿素的細菌也能在該培養(yǎng)基上生長）    將同學丁配制的選擇培養(yǎng)基不接種而置于相同環(huán)境下培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否被污染（可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為條件對照，判斷選擇培養(yǎng)基是否起到選擇的作用）．

點評 本題考查了微生物培養(yǎng)技術的相關知識，考生要明確選擇培養(yǎng)基的選擇作用；識記培養(yǎng)基為微生物提供的營養(yǎng)成分，識記常用的接種方法和具體操作過程；特別注意滅菌和消毒的對象和區(qū)別．