Question

1．2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家．綠色熒光蛋白能在藍(lán)光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的螢光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動(dòng)情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能．圖為我國(guó)首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過(guò)程示意圖，據(jù)圖回答：

注：圖中通過(guò)過(guò)程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒．限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-G^↓GATCC-，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-^↓GATC-．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)．
（1）在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來(lái)可以連接，理由是：因?yàn)橛蓛煞N不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互補(bǔ)的）．
（2）限制性內(nèi)切酶的作用于DNA分子的磷酸二酯鍵，除限制酶外還需要的工具酶是DNA連接酶．
（3）重組質(zhì)粒中除目的基因外還需含有的成分為復(fù)制起始點(diǎn)、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子（至少回答三個(gè)，）．
（4）過(guò)程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時(shí)，采用最多的方法是顯微注射技術(shù)．
（5）如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達(dá)的基因一起構(gòu)建到載體上，GFP基因可以作為基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因，其作用是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因．
（6）目前科學(xué)家們通過(guò)蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過(guò)程的正確順序是：②①③④（用數(shù)字表示）．①推測(cè)藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)序列③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示為我國(guó)首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過(guò)程示意圖，其中①表示獲取目的基因（綠色．熒光蛋白基因）的過(guò)程；②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程；③表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．此外還采用了核移植、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)．

解答 解：（1）①限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-G^↓GATCC-，則圖2中被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端為：、．
②酶Ⅰ和酶Ⅱ識(shí)別序列不同，但切割后產(chǎn)生的黏性末端相同，因此在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端可以連接．
（2）制性內(nèi)切酶的作用于DNA分子的磷酸二酯鍵，除限制酶外還需要的工具酶是DNA連接酶．
（3）基因表達(dá)載體的組成包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)等．
（4）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，采用最多也最有效的方法是顯微注射法．
（5）標(biāo)記基因的作用是鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因．
（6）蛋白質(zhì)工程的操作過(guò)程：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）→基因表達(dá)合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)．因此采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過(guò)程的正確順序是：②①③④．
故答案為：
（1）可以連接      因?yàn)橛蓛煞N不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互補(bǔ)的）
（2）磷酸二酯鍵     DNA連接酶
（3）復(fù)制起始點(diǎn)、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子（任答三個(gè)）
（4）顯微注射技術(shù)
（5）為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因
（6）②①③④

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合我國(guó)首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過(guò)程示意圖，考查基因工程的原理及技術(shù)、核移植技術(shù)及胚胎工程技術(shù)，重點(diǎn)考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具及操作過(guò)程，能準(zhǔn)確判斷圖中各步驟的名稱及采用的生物技術(shù)．