Question

【題目】尼古丁是一種化學(xué)物質(zhì)，該物質(zhì)對(duì)人類有致畸、致癌等毒副作用。下圖是從工業(yè)廢水中篩選出能降解尼古丁的假單胞桿菌的操作流程圖。請(qǐng)回答下列相關(guān)問題：

（1）培養(yǎng)基中要有滿足微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的___________等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。制備平板培養(yǎng)基與稀釋用的培養(yǎng)基主要的區(qū)別在于制備平板培養(yǎng)基時(shí)，其中需要添加___________。

（2）選擇培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用選擇培養(yǎng)基，目的是使該培養(yǎng)基利于__________________的生長(zhǎng)繁殖。對(duì)選擇培養(yǎng)后得到的樣液進(jìn)行稀釋操作的具體過程是：①將分別盛有9mL水的5支試管苗菌，并按101—105的順序編號(hào)；②______________________。③重復(fù)第②步的混勻操作，依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。

（3）取105倍的稀釋樣液0.1mL均勻涂布到平板上，然后在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)時(shí)需要將培養(yǎng)皿倒置，原因是____________________；經(jīng)過一段時(shí)間培養(yǎng)，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為42、52和68，則每升樣液中所含有的假單孢桿菌活菌數(shù)量為__________個(gè)，這一統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般比實(shí)際活菌數(shù)__________（填“偏小”“偏大”或“相等”）。

Answer 1

【答案】水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源瓊脂（或凝固劑）假單胞桿菌（或目的菌）用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中并混勻，再?gòu)?01倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的是試管中防止冷凝水落到培養(yǎng)基上引起污染5.4×1010偏小

【解析】

微生物的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。微生物的接種方法有平板劃線法與稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可用于微生物的計(jì)數(shù)。用稀釋涂布平板法測(cè)定同一樣品中的假單胞桿菌數(shù)時(shí)，在每一個(gè)梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，求其平均值，再通過計(jì)算得出樣品中的假單孢桿菌活菌總數(shù)。

（1）微生物的生長(zhǎng)繁殖需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源，平板培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，制備時(shí)需要加入瓊脂（或凝固劑）。

（2）選擇培養(yǎng)的目的是增加所需微生物的濃度，該培養(yǎng)基有利于假單胞桿菌（或目的菌）的生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)能抑制或阻止其他微生物的繁殖，對(duì)選擇培養(yǎng)后得到的樣液進(jìn)行稀釋操作的具體過程是：①將分別盛有9mL水的5支試管苗菌，并按101—105的順序編號(hào)；②用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中并混勻，再?gòu)?/span>101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的是試管中。③重復(fù)第②步的混勻操作，依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。

（3）涂布好平板后，在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)時(shí)需要將培養(yǎng)皿倒置，其原因是防止凝結(jié)在皿蓋上的冷凝水落到培養(yǎng)基表面引起污染，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為42、52和68，3個(gè)平板上的菌落的平均數(shù)為（42+52+68）/3=54個(gè)，則每升樣液中所含有的假單孢桿菌活菌數(shù)量為54/0.1×105×103=5.4×1010個(gè)。因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，因此這一統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般比實(shí)際活菌數(shù)偏小。