Question

11．回答基因工程的基本操作程序中的有關問題．
（1）目的基因的獲�。簽樵诙虝r間內(nèi)大量獲得目的基因，可用PCR技術擴增的方法，其原理是DNA復制．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：基因表達載體的組成，除具有復制原點、目的基因外，還必須具有啟動子、終止子、標記基因等．啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位．標記基因的作用是為了鑒別和篩選含有目的基因的細胞．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：將目的基因?qū)�入某單子葉植物細胞，常采用的方法是基因槍法；將目的基因?qū)�入動物細胞，常采用的受體細胞是受精卵；將目的基因?qū)�入大腸桿菌，大腸桿菌應先用Ca²⁺處理，使其成為感受態(tài)細胞．
（4）目的基因的檢測與鑒定：檢測目的基因是否表達，在分子水平上可采用的檢測辦法是抗原-抗體雜交；在個體水平上，如抗蟲棉，需要做抗蟲的接種實驗．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）目的基因的獲取方法有：從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．其中PCR技術可在短時間內(nèi)大量獲得目的基因，其原理是DNA復制．
（2）基因表達載體的組成包括復制原點、目的基因外、啟動子、終止子、標記基因等，其中啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位．標記基因的作用是為了鑒別和篩選含有目的基因的細胞．
（3）將目的基因?qū)�入某單子葉植物細胞，常采用基因槍法；將目的基因?qū)�入動物細胞常采用的受體細胞是受精卵，因為受精卵的全能性最高；將目的基因?qū)�入大腸桿菌，常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即大腸桿菌應先用Ca²⁺處理，使其成為感受態(tài)細胞．
（4）目的基因的檢測與鑒定：檢測目的基因是否表達，在分子水平上可采用的檢測辦法是抗原-抗體雜交；在個體水平上，如抗蟲棉，需要做抗蟲的接種實驗．
故答案為：
（1）PCR技術　  DNA復制
（2）終止子   RNA聚合酶    鑒別和篩選含有目的基因的細胞
（3）基因槍法  受精卵     Ca²⁺
（4）抗原-抗體雜交    抗蟲的接種實驗

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合所學的知識準確答題．