Question

10．科學(xué)家通過(guò)基因工程培育抗蟲(chóng)棉時(shí)，需要從蘇云金芽孢桿菌中提取出抗蟲(chóng)基因，“放入”棉花的細(xì)胞中與棉花的DNA結(jié)合起來(lái)并發(fā)揮作用，請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：
（1）從蘇云金芽孢桿菌中切割抗蟲(chóng)基因所用的工具是限制性內(nèi)切酶，此工具主要存在于微生物中，其特點(diǎn)是一種限制性內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸系列，并在特定的點(diǎn)位切割．
（2）基因表達(dá)載體的組成除了有目的基因外，還必須有復(fù)制原點(diǎn)、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因．
（3）進(jìn)行基因操作一般要經(jīng)過(guò)的四個(gè)步驟是：獲取目的基因，構(gòu)建基因表達(dá)載體，將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，目的基因的檢測(cè)與鑒定．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）從供體細(xì)胞中獲取目的基因需要利用限制酶．限制酶主要從原核生物中分離純化出來(lái)，能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端或平末端．
（2）基因表達(dá)載體的組成除了有目的基因外，還必須有復(fù)制原點(diǎn)、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因．
（3）進(jìn)行基因工程操作一般要經(jīng)過(guò)的四個(gè)步驟是：目的基因的獲��；基因表達(dá)載體的構(gòu)建（或目的基因與運(yùn)載體結(jié)合）；將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；目的基因的檢測(cè)與鑒定．
故答案為：
（1）限制性內(nèi)切酶    微生物  一種限制性內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸系列，并在特定的點(diǎn)位切割．
（2）終止子   標(biāo)記基因
（3）獲取目的基因 構(gòu)建基因表達(dá)載體  將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞  目的基因的檢測(cè)與鑒定

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的原理及技術(shù)，要求考生識(shí)記基因工程的原理，掌握基因工程的具體操作步驟及各步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．