Question

【題目】探究如何從土壤中分離自生固氮菌并計(jì)數(shù)。

實(shí)驗(yàn)原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多。將用表層土制成的稀泥漿,接種到無(wú)氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長(zhǎng)繁殖。

材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛9 mL無(wú)菌水的大試管若干、無(wú)菌移液管、無(wú)菌涂布器、無(wú)菌培養(yǎng)皿、盛90 mL無(wú)菌水的錐形瓶、酒精燈、恒溫箱。

方法步驟：

（1）倒平板。分別將無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，應(yīng)在_________________________操作。

（2）制備土壤稀釋液。取土樣10 g加入盛有90 mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻。用無(wú)菌移液管吸取上清液 1 mL，轉(zhuǎn)至9 mL無(wú)菌水的大試管中，依次稀釋到107倍稀釋度。為實(shí)現(xiàn)無(wú)菌操作，試管口和移液管應(yīng)在離火焰 cm處。

（3）涂布。按照由107～103稀釋度的順序分別吸取0.1 mL進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無(wú)氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布3個(gè)平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布 個(gè)平板。

（4）培養(yǎng)。放入恒溫箱內(nèi)，在適宜溫度條件下培養(yǎng)3～4d。一般每隔24h統(tǒng)計(jì)一次，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止 。

（5）細(xì)菌的計(jì)數(shù)。選取菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。如果測(cè)試的平均值為50，則每克樣品中的菌株數(shù)是 。（稀釋度是105）

（6）預(yù)期結(jié)果。相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù) （填“多于”或“少于”）無(wú)氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。理由是_____________________________________________________________（2分）。

Answer 1

【答案】

（1）酒精燈火焰旁

（2）1～2

（3）1

（4）因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目

（5）5×107

（6）多于 無(wú)氮培養(yǎng)基上可以生存和繁殖的只是土壤中的自生固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類的生存

【解析】

試題分析：

（1）倒平板應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止雜菌污染．

（2）為實(shí)現(xiàn)無(wú)菌操作，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處。

（3）按照由101～108倍稀釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無(wú)氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布3個(gè)平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布1個(gè)平板做對(duì)照．

（4）一般每隔24h統(tǒng)計(jì)一次，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目

（5）當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取茵落數(shù)在30-300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．如果測(cè)試的平均值為50，則每克樣品中的菌落數(shù)是（稀釋度是105倍）5×107。

（6）牛肉膏蛋白胨平板上的菌落數(shù)多于無(wú)氮培養(yǎng)基上的數(shù)目，原因是無(wú)氮培養(yǎng)基上能生存繁殖的僅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存．