Question

【題目】圖顯示了某DNA片段的部分堿基序列和長(zhǎng)度（bp表示堿基對(duì)）以及其中含有的目的基因D。圖29表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列�，F(xiàn)有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I共4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。

（1）圖的一條多核苷酸鏈中，位于相鄰兩個(gè)堿基之間的是____________。

A．氫鍵 B．磷酸、脫氧核糖

C．脫氧核糖 D．脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖

（2）若用限制酶SmaI完全切割圖的DNA片段，產(chǎn)生的末端是___________末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為___________________________。

（3）若圖中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換，那么基因D就突變?yōu)榛��?/span>d。從雜合子中分離出圖28及其對(duì)應(yīng)的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，產(chǎn)物中共有______種不同長(zhǎng)度的DNA片段。

（4）若將圖中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后，再用________進(jìn)行處理，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是_________。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌,一般需要用添加_________的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌。經(jīng)檢測(cè)，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是____________________________________________________。

Answer 1

【答案】D 平 537bp、790bp、661bp 4 DNA連接酶 BamH I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向鏈接

【解析】

通讀整道題目，可知本題在考查DNA分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：DNA是由兩條反向平行的脫氧核苷酸長(zhǎng)鏈盤旋而成的雙螺旋結(jié)構(gòu)；DNA的外側(cè)由脫氧核糖和磷酸交替連接構(gòu)成的基本骨架，內(nèi)側(cè)是堿基通過(guò)氫鍵連接形成的堿基對(duì)，堿基之間的配對(duì)遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則A-T、C-G。限制性核酸內(nèi)切酶的功能和目的基因的篩選等內(nèi)容。

（1）DNA鏈的結(jié)構(gòu)圖如下：

一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖連接。

（2）若被限制性核酸內(nèi)切酶切割后的DNA末端有幾個(gè)未配對(duì)的核苷酸片段，這樣的末端為粘性末端；若被限制性核酸內(nèi)切酶切割后的DNA末端是平整的，這樣的末端為平末端。Sma Ⅰ識(shí)別的序列為GGGCCC，切割后會(huì)產(chǎn)生平末端；圖一所示的DNA分子中含有兩個(gè)SmaⅠ的識(shí)別位點(diǎn)，第一個(gè)識(shí)別位點(diǎn)在左端534bp序列向右三個(gè)堿基對(duì)的位置；第二個(gè)識(shí)別位點(diǎn)在右端658bp序列向左三個(gè)堿基對(duì)的位置，從這兩個(gè)位點(diǎn)切割后產(chǎn)生的DNA片段長(zhǎng)度分別為534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段長(zhǎng)度分別為537bp、790bp和661bp。

（3）在雜合子體內(nèi)含有基因D和基因d，根據(jù)上一小題結(jié)論，基因D經(jīng)過(guò)SmaⅠ完全切割會(huì)產(chǎn)生537bp、790bp和661bp三種不同長(zhǎng)度的片段。而基因d的序列中含有一個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，經(jīng)過(guò)切割后會(huì)產(chǎn)生（534+796-3）bp和（ 658+3）bp兩種長(zhǎng)度的片段。綜上所述，雜合子中分離得到該基因的DNA片段經(jīng)過(guò)切割后會(huì)產(chǎn)生4種不同長(zhǎng)度的片段。

（4）能夠獲取目的基因并切開(kāi)質(zhì)粒的限制酶有識(shí)別序列為GGATCC的BamH Ⅰ和識(shí)別序列為GATC的MboⅠ，若使用MboⅠ會(huì)同時(shí)破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH Ⅰ來(lái)切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌。

用添加抗生素B 的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，若大腸桿菌可以存活說(shuō)明其被導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，否則，大腸桿菌沒(méi)有被導(dǎo)入重組質(zhì)粒。

目的基因和運(yùn)載體用同種限制酶切割時(shí)，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個(gè)末端都能進(jìn)行互補(bǔ)，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運(yùn)載體上的情況，導(dǎo)致基因D不能正確表達(dá)。