Question

【題目】農(nóng)業(yè)科技工作者在煙草中找到了一抗病基因，現(xiàn)擬采用基因工程技術將該基因轉入棉花，培育抗病棉花品系。請回答下列問題。

(1)要獲得該抗病基因，可采用_____、_____等方法。

(2)要使載體與該抗病基因連接，首先應使用___________進行切割。假如載體被切割后，得到的分子末端序列為，則能與該載體連接的抗病基因分子末端是 （___）

(3)切割完成后，采用________酶將載體與該抗病基因連接，在構建的基因表達載體中，除含有目的基因外，還必須有________終止子和____________。

(4)再將連接得到的重組DNA分子導入農(nóng)桿菌，然后用該農(nóng)桿菌去_______棉花細胞，從而將目的基因導入受體細胞，要鑒定受體細胞中是否導入目的基因，可根據(jù)標記基因表達出來的性狀來確定，從而將含有目的基因的細胞篩選出來，再利用植物細胞具有的______性特點進行組織培養(yǎng)，培育出的轉基因植物，要檢測目的基因是否轉錄，檢測的方法是采用_______，要檢測目的基因是否表達，檢測的方法采用 ____________。

Answer 1

【答案】從物種中分離(或從基因文庫) 人工合成 限制性核酸內切酶(限制酶) A DNA連接酶 啟動子 標記基因 感染 全能 分子雜交技術 抗原—抗體雜交技術

【解析】

本題考查基因工程的相關內容，要求考生掌握基因工程常用的三種工具及作用；識記基因工程的操作步驟，能結合所學的知識答題，旨在考查考生的理解能力與綜合運用能力，屬于考綱識記和理解層次的考查。

（1）抗病基因屬于目的基因，獲取目的基因的方法：從物種中分離(或從基因文庫)、人工合成等；

（2）構建基因表達載體時，需先用限制酶切割運載體和含有目的基因的外源DNA分子；含有相同黏性末端的DNA分子片段才能在DNA連接酶的作用下連接起來，若載體被切割后，得到的分子末端序列為，則能與該載體連接的抗病基因分子末端是，故選A；

（3）切割完成后，需采用DNA連接酶將載體與該抗病基因連接形成重組DNA分子；在構建的基因表達載體中，除含有目的基因外，還必須有啟動子、終止子和標記基因；

（4）再將連接得到的DNA分子導入農(nóng)桿菌，然后用該農(nóng)桿菌去感染棉花細胞；根據(jù)植物細胞全能性原理，采用植物組織培養(yǎng)技術將受體細胞培養(yǎng)成轉基因植株，最后篩選出抗病的棉花；培育出的轉基因植物，要檢測目的基因是否轉錄，檢測的方法是采用分子雜交技術，要檢測目的基因是否表達（產(chǎn)物是蛋白質），檢測的方法采用抗原—抗體雜交技術，兩者均屬于分子水平的檢測，檢測結果是看是否有雜交帶出現(xiàn)。