Question

【題目】CAR--T細胞療法是通過設(shè)計CAR基因，并導(dǎo)人癌癥患者的T細胞中，使其轉(zhuǎn)化為CAR-T細胞，CAR--T細胞膜上的CAR蛋白與癌細胞表面抗原特異結(jié)合后，激活CAR-T細胞使其增殖、分化，從而實現(xiàn)對癌細胞的特異性殺傷和記憶。主要過程如下圖。請回答：

（1）要獲取CAR基因，可采取PCR技術(shù)進行大量擴增，前提是_________________________。

（2）將CAR基因?qū)�人患�?/span>T細胞前，需完成過程[①]___________________該過程中先要用___________切割含有CAR基因的DNA片段和_______， 以形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接形成pCDH-CAR， pCDH- -CAR上除了目的基因外，還有一些必須的部分，比如_________________，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位。

（3）完成過程②常用方法是____________法。此外，還可以先將CAR基因整合到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中，再利用病毒的________________性導(dǎo)人并將CAR基因整合到T細胞的_________________上。

（4）檢測CAR- T 細胞中的CAR基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA所采用的方法是_________________________。

（5）在將CAR--T細胞輸給病人進行治療之前，還需在實驗室內(nèi)進行細胞擴增培養(yǎng)。體外培養(yǎng)CAR-T細胞的培養(yǎng)液中除合成培養(yǎng)基的成分外，一般還需添加_____________________________________等天然成分。

Answer 1

【答案】CAR基因序列已知 構(gòu)建基因表達載體 限制性核酸內(nèi)切酶 pCDH質(zhì)粒 啟動子 顯微注射 侵染 染色體DNA 分子雜交技術(shù) 血清（血漿）

【解析】

根據(jù)題意可得，CAR-T細胞療法實際為通過基因工程改變患者T細胞的基因，使其能夠產(chǎn)生CAR蛋白以特異性殺傷癌細胞。過程①表示獲得重組DNA分子，過程②表示將重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細胞；過程③表示對癌細胞的特異性殺傷和記憶。

（1）利用PCR技術(shù)對CAR基因進行大量擴增的前提是CAR基因序列已知；

（2）CAR基因為目的基因，在將該基因?qū)�人患�?/span>T細胞前，需完成基因表達載體，即過程①；該過程需要用同種限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）切割目的基因和運載體（pCDH質(zhì)粒），以形成相同的黏性末端；基因表達載體上RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位是啟動子；

（3）過程②表示將重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細胞，動物細胞常用方法為顯微注射法；病毒為寄生生物，故可以利用病毒的侵染特性導(dǎo)入并將CAR基因整合到T細胞的染色體DNA上；

（4）目的基因的檢測與鑒定的第二步是檢測目的基因（CAR）基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是分子雜交技術(shù)；

（5）動物細胞培養(yǎng)時常加入血清（血漿）等天然成分。