Question

6．如圖是某轉(zhuǎn)基因煙草的培育過程，箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)．請(qǐng)據(jù)圖分析回答：

（1）已知幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)如表所示：

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
識(shí)別序列及 其切割位點(diǎn)

圖中①、②過程為減少質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，并使插入片段盡可能小，應(yīng)選用限制酶EcoRI和HindⅢ對(duì)外源DNA、質(zhì)粒進(jìn)行切割．圖中所示的質(zhì)粒分子經(jīng)Sma I切割后含有2個(gè)游離的磷酸集團(tuán)．若需要對(duì)Sma I切割過后的末端進(jìn)行連接，應(yīng)使用    DNA連接酶處理．
（2）經(jīng)⑥過程形成不同的組織器官，是細(xì)胞分裂和分化的結(jié)果．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示轉(zhuǎn)基因煙草的培育過程，①是含有目的基因的外源DNA分子；②是質(zhì)粒，可作為基因工程的運(yùn)載體；③表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；④表示采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；⑤表示脫分化過程；⑥表示再分化過程．

解答 解：（1）限制酶SmaI位于目的基因中，用此酶切割會(huì)破壞目的基因．所以為減少質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，并使插入片段盡可能小，應(yīng)選用限制酶EcoRI和HindⅢ對(duì)外源DNA、質(zhì)粒進(jìn)行切割．圖中質(zhì)粒只含有一個(gè)限制酶Sma I的切割位點(diǎn)，所以圖示質(zhì)粒分子經(jīng)Sma I切割后含有2個(gè)游離的磷酸集團(tuán)．Sma I切割過后形成的是平口末端，T₄DNA連接酶可以連接平末端．
（2）經(jīng)⑥過程形成不同的組織器官，是細(xì)胞分裂和分化的結(jié)果．
故答案為：
（1）EcoRI和HindⅢ2個(gè)   T4 
（3）分裂和分化

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因煙草的培育過程圖，考查基因工程的應(yīng)用、PCR技術(shù)的原理和條件、植物組織培養(yǎng)過程等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的操作步驟和植株組織培養(yǎng)過程，能準(zhǔn)確判斷圖中各數(shù)字表達(dá)的含義，結(jié)合圖中質(zhì)粒和外源DNA分子的含有酶切位點(diǎn)的情況，選擇合適的限制酶進(jìn)行切割．