Question

【題目】為了研究如何提高油菜種子的含油量，研究者將轉運肽基因與酶D基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉基因油菜．請據(jù)圖回答：
（1）研究人采用PCR技術獲取酶D基因和轉運肽基因，該技術是利用的原理，使相應基因呈指數(shù)增加．此技術中最重要的酶是 ． 三種限制酶（Xbal、Clal、SacI）的切點如圖所示，則用和酶處理兩個基因后，可得到兩基因相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入如圖所示Ti質粒的中構建基因表達載體，說明此結構的兩端有和酶的切割序列．然后把重組質粒導入農(nóng)桿菌中，為了獲得含融合基因的單菌落，應進行的操作是 ， 然后再利用液體培養(yǎng)基將該單菌落振蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的侵染液．
（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是 ， 進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，依據(jù)的原理，可將其培育成轉基因油菜植株．
（4）用法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．

Answer 1

【答案】
（1）DNA復制；耐高溫的DNA聚合酶；ClaⅠ；DNA連接
（2）T﹣DNA；XbaⅠ；SacⅠ；將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)
（3）利用農(nóng)桿菌將融合基因導入油菜細胞；細胞具有全能性
（4）抗原﹣抗體雜交
【解析】解：（1）PCR技術利用的原理是DNA雙鏈復制，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因．此技術中最重要的酶是耐高溫的DNA聚合酶．用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，可以得到A、D端相連的融合基因．（2）將上述融合基因插入圖中Ti質粒的T﹣DNA中，能夠構建表達載體即重組質粒，說明此結構的兩端有XbaⅠ和SacⅠ酶的切割序列．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的浸染液．（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因導入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞．依據(jù)細胞具有全能性的原理，通過植物組織培養(yǎng)技術，可培育成轉基因油菜植株．（4）用抗原﹣抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．
【考點精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術的相關知識點，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術才能正確解答此題．