Question

【題目】如圖是獲得藥用乳腺生物反應器轉基因小鼠的流程圖。回答下列問題：

(1)圖中在Ⅰ過程前提取mRNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是___。

通過PCR擴增目的基因的過程中，兩個引物是___的結合位點，也是子鏈延伸的起點。

(2)圖中Ⅱ過程在構建基因表達載體時，有時需要使用兩種限制酶切割目的基因所在的片段，同時也用這兩種限制酶切割質粒，這樣做的優(yōu)點是___。

(3)圖中Ⅲ過程獲得的小鼠Es細胞在飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)，Es細胞表現為__的特點。Ⅳ過程中要將含外源基因的Es細胞導入囊胚的，然后進行胚胎移植。若要一次獲得多只相同性狀的后代，胚胎移植前應采用___技術，通常選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的囊胚或進行操作。

(4)若獲得的已整合藥用蛋白基因的轉基因小鼠分泌的乳汁中檢測不到藥用蛋白，根據中心法則分析，其可能的原因是__。

Answer 1

【答案】防止RNA被RNA酶水解 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Tag酶） 避免目的基因及質粒的自身環(huán)化和隨意連接 只分裂而不發(fā)生分化 內細胞團 胚胎分割 桑椹胚 藥用蛋白基因沒有轉錄或翻譯

【解析】

胚胎移植的基本程序主要包括：

①對供、受體的選擇和處理。選擇遺傳特性和生產性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質和正常繁殖能力的受體，供體和受體是同一物種。并用激素進行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對供體母牛做超數排卵處理。

②配種或人工授精。

③對胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。配種或輸精后第7天，用特制的沖卵裝置，把供體母牛子宮內的胚胎沖洗出來（也叫沖卵）。對胚胎進行質量檢查，此時的胚胎應發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段。直接向受體移植或放入-196℃的液氮中保存。

④對胚胎進行移植。

⑤移植后的檢查。對受體母牛進行是否妊娠的檢查。

(1)圖中在目的基因獲取前提取mRNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是防止提取的mRNA被RNA酶分解。通過PCR擴增目的基因的過程中，兩個引物是熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Tag酶）的結合位點，也是子鏈延伸的起點。

(2)圖中Ⅱ過程在構建基因表達載體時，使用兩種限制酶同時切割目的基因和質粒，這樣做的優(yōu)點是避免目的基因及質粒的自身環(huán)化和隨意連接。

(3)小鼠Es細胞在飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)，Es細胞表現為只分裂而不發(fā)生分化的特點。Ⅳ過程中要將含外源基因的Es細胞導入囊胚的內細胞團，然后進行胚胎移植。胚胎移植前，通常選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的囊胚或桑椹胚階段的內細胞團均等分割，采用胚胎分割技術，一次獲得多只相同性狀的后代。

(4) 由于轉基因表達產物存在于小鼠的乳汁中，檢測其體內是否出現該藥用蛋白，在分子水平上的檢測方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原—抗體雜交，若有雜交帶出現表明藥用蛋白基因已經沒有轉錄或翻譯，形成蛋白質產品；若檢測不到藥用蛋白，說明藥用蛋白基因沒有轉錄或翻譯。