Question

8．微生物的抗性突變是自發(fā)產(chǎn)生的還是與相應(yīng)的環(huán)境因素有關(guān)．有人設(shè)計(jì)下列實(shí)驗(yàn)，以研究探討該問題．實(shí)驗(yàn)選用對(duì)鏈霉素敏感的大腸桿菌K12．培養(yǎng)基3、7、11中含有鏈霉素，其它培養(yǎng)基中不含鏈霉素．請(qǐng)據(jù)實(shí)驗(yàn)回答：
（1）將原始對(duì)鏈霉素敏感大腸桿菌K12菌種涂布在培養(yǎng)皿1的表面培養(yǎng)，接著通過如圖“印章”將培養(yǎng)皿1中的菌群“印”在培養(yǎng)皿2、3上培養(yǎng)．“印章”位置保持不變．培養(yǎng)皿3根據(jù)其功能，稱為選擇培養(yǎng)基．“印章”使用前需作滅菌處理．
（2）培養(yǎng)基3的A點(diǎn)處有菌落生長，將培養(yǎng)基2中相應(yīng)的A點(diǎn)位置的菌落上挑出少量移入培養(yǎng)基4中．如圖反復(fù)幾次實(shí)驗(yàn)．請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象解釋“微生物的突變是自發(fā)的還是環(huán)境因素導(dǎo)致的”：自發(fā)突變的，原因是因?yàn)榭规溍顾鼐�種的獲得是從沒有接觸過鏈霉素的敏感細(xì)菌中獲得的．
（3）要分離出單個(gè)菌落，除了本實(shí)驗(yàn)中的涂布法外，還可以用平板劃線法．
（4）上述不含鏈霉素培養(yǎng)基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基．
（5）現(xiàn)有5種營養(yǎng)缺陷型菌株1、2、3、4、5，它們不能合成生長所必需的物質(zhì)G，已知A、B、C、D、E都是合成G物質(zhì)的必需中間產(chǎn)物，但不知這些物質(zhì)合成的順序，于是在培養(yǎng)基中分別加入這幾種物質(zhì)并分析了這幾種物質(zhì)對(duì)各種營養(yǎng)缺陷型菌株生長的影響，結(jié)果如表所示．根據(jù)以下結(jié)果，推測(cè)這幾種物質(zhì)的合成順序應(yīng)是E→A→C→B→D→G．

物質(zhì)	培養(yǎng)基中加入的物質(zhì)
突變體	A	B	C	D	E	G
1	-	-	-	+	-	+
2	-	+	-	+	-	+
3	-	-	-	-	-	+
4	-	+	+	+	-	+
5	+	+	+	+	-	+

（+：表示生長-：表示不生長）

Answer 1

分析 1、影印法接種的具體過程是：將待測(cè)的濃縮菌懸液涂在合適的平板上，等其長好后作為母平板（每平板上的菌落控制在50～300個(gè)）；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構(gòu)成印章（即接種工具）；然后把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基的平板上輕輕印一下，經(jīng)培養(yǎng)后，選擇培養(yǎng)基平板上長出的菌落與母平板上的菌落位置對(duì)應(yīng)，比較影印平板與母平板上菌落生長情況，即可從相應(yīng)位置的母平板上選出待測(cè)的突變型菌落．影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發(fā)的、與相應(yīng)的環(huán)境因素?zé)o關(guān)而設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)，目前已廣泛應(yīng)用于營養(yǎng)缺陷型的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中．
2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．

解答 解：（1）培養(yǎng)基3加入了鏈霉素，只有抗鏈霉素大腸桿菌K12才能在上面生長，所以是選擇培養(yǎng)基；印章在使用前必須進(jìn)行滅菌處理，以消除印章上的雜菌對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響．
（2）通過題圖及問題描述分析可知，抗鏈霉素菌種的獲得是從沒有接觸過鏈霉素的敏感細(xì)菌中獲得的，所以抗鏈霉素菌種的突變是自發(fā)突變，不是環(huán)境因素引起．
（3）由題圖看出，接種時(shí)用的是稀釋涂布平板法，除此以外分離菌種常用的方法還有平板劃線法．
（4）題圖中不含鏈霉素的培養(yǎng)基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基．
（5）由表格可知，加入G，5種突變體都能在上面生長，加入D，4種突變體能在上面生長，加入B，3種突變體能在上面生長，加入C，2種突變體能在上面生長，加入A，1種突變體能在上面生長，加入E，5種突變體都不能在上面生長．所以這幾種物質(zhì)的合成順序應(yīng)是E→A→C→B→D→G．
故答案為：
（1）選擇    滅菌
（2）自發(fā)突變的      因?yàn)榭规溍顾鼐�種的獲得是從沒有接觸過鏈霉素的敏感細(xì)菌中獲得的
（3）平板劃線
（4）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
（5）E→A→C→B→D→G

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查微生物的影印法培養(yǎng)，意在考查選擇培養(yǎng)的過程，提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)過程分析能力和相關(guān)實(shí)驗(yàn)技能．