Question

19．利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將環(huán)斑病毒復(fù)制酶（PRVRP）基因轉(zhuǎn)入木瓜，可獲得的高抗優(yōu)質(zhì)的轉(zhuǎn)基因木瓜品系．請回答問題：
（1）PRVRP基因稱為目的基因，常用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增時(shí)，需要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物質(zhì)有引物、模板（目的基因或PRVRP基因）、4種脫氧核苷酸和耐熱性的DNA聚合酶，擴(kuò)增過程可以在PCR擴(kuò)增儀中完成．
（2）構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)在目的基因的首端和尾端安插上啟動(dòng)子和終止子，使目的基因能夠轉(zhuǎn)錄（或表達(dá)）．構(gòu)建好的目的基因表達(dá)載體一般通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法法導(dǎo)入到木瓜細(xì)胞中，最終獲得轉(zhuǎn)基因植株．
（3）PRVRP基因的遺傳特性能在木瓜植株體內(nèi)維持和表達(dá)的關(guān)鍵是目的基因插入到受體細(xì)胞的染色體DNA上（PRVRP基因插入到木瓜細(xì)胞的染色體DNA上），這需要通過檢測才能知道，檢測采用的方法是DNA分子雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：
（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）PRVRP基因稱為目的基因；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，需要的條件有：一對(duì)引物、模板（目的基因或PRVRP基因）、4種脫氧核苷酸和耐熱性的DNA聚合酶等．
（2）基因表達(dá)載體的組成包括啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因和終止子，因此構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)在目的基因的首端和尾端安插上啟動(dòng)子和終止子，使目的基因能夠轉(zhuǎn)錄（或表達(dá)）．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）目的基因（PRVRP基因）的遺傳特性能在受體植株體內(nèi)維持和表達(dá)的關(guān)鍵是目的基因插入到受體細(xì)胞的染色體DNA上（PRVRP基因插入到木瓜細(xì)胞的染色體DNA上）；檢測目的基因是否插入受體細(xì)胞的染色體DNA上，可采用DNA分子雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）目的基因      引物      模板（目的基因或PRVRP基因）
（2）啟動(dòng)子    轉(zhuǎn)錄（或表達(dá)）     農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（3）目的基因插入到受體細(xì)胞的染色體DNA上（PRVRP基因插入到木瓜細(xì)胞的染色體DNA上）     DNA分子雜交技術(shù)

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟等，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．