Question

科學(xué)家發(fā)現(xiàn)家蠅體內(nèi)存在一種抗腫瘤蛋白（且具有抗菌能力），受到研究者重視．臨床使用發(fā)現(xiàn)此蛋白質(zhì)對(duì)腫瘤確良好的療效，可以通過基因工程技術(shù)導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)進(jìn)行大量生產(chǎn)．其過程大體如圖所示：
（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有

 

（至少寫出兩種）．
（2）圖中a過程叫

 

，它是基因操作的核心步驟．
（3）將抗腫瘤基因?qū)�入大腸桿菌，并在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)產(chǎn)生了抗腫瘤蛋白，由于

 

，因此在短時(shí)間內(nèi)就能獲得大量的抗腫瘤蛋白．

（4）細(xì)胞工程可以作為輔助手段，通過獲得特定的單克隆抗體并與抗腫瘤蛋白結(jié)合制成“生物導(dǎo)彈”，以實(shí)現(xiàn)“靶向殺癌”．下面是單克隆抗體制備過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答：
①圖中A過程從小鼠的脾臟中取得的“小鼠細(xì)胞”是

 

細(xì)胞，要獲得能產(chǎn)生抗腫瘤蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞至少要經(jīng)過

 

次篩選．從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，給小鼠注射的特定的物質(zhì)是

 

．
②實(shí)驗(yàn)室無法單獨(dú)培養(yǎng)能獲得單克隆抗體的細(xì)胞．通過細(xì)胞工程獲得的雜交瘤細(xì)胞由于具備

 

的優(yōu)點(diǎn)，使單抗技術(shù)獲得成功．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),單克隆抗體的制備過程

專題：

分析：1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．

解答： 解：（1）在基因工程中，獲取目的基因的方法有從基因文庫中獲取目的基因、PCR擴(kuò)增目的基因、人工合成目的基因．
（2）圖中a為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，它是基因工程的核心步驟．
（3）選用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，由于其繁殖速度快、產(chǎn)量較高，因此可以在短時(shí)間內(nèi)獲得要表達(dá)的蛋白質(zhì)．
（4）①單克隆抗體的制備過程中，采用的是已免疫的小鼠B細(xì)胞（漿細(xì)胞或效應(yīng)B細(xì)胞），即經(jīng)過注射特異性抗原，然后和骨髓瘤細(xì)胞的融合，需要經(jīng)過至少兩次篩選（第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選獲得能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞），最終篩選出來的雜交瘤細(xì)胞．
②最終篩選出的雜交瘤細(xì)胞既能在體外條件下大量增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體．
故答案為：
（1）從基因文庫中獲取目的基因、PCR擴(kuò)增目的基因、人工合成目的基因
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體
（3）繁殖快、產(chǎn)量較高
（4）①漿（效應(yīng)B）    2    特異性抗原（或癌細(xì)胞）
 ②既能在體外條件下大量增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖解，考查基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的操作步驟，掌握各步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記單克隆抗體的制備過程，能結(jié)合圖解準(zhǔn)確答題．