Question

【題目】荔枝、龍眼果實風(fēng)味佳，而成熟荔枝極不耐保存。科研人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)和植物體細(xì)胞雜交技術(shù)對荔枝、龍眼的育種開展研究。請回答下列問題：

(1)荔枝愈傷組織分化的胚狀體在培養(yǎng)時存在嚴(yán)重玻璃化、畸形胚多的現(xiàn)象，科研人員通常采用___________(填方法)導(dǎo)入外源hpt基因和gus基因，來獲得穩(wěn)定再生胚性愈傷組織(TPEC)。培養(yǎng)荔枝愈傷組織的培養(yǎng)基中除需要添加無機營養(yǎng)成分、有機背養(yǎng)成分外，還需要添加______________(答出兩點即可)等。

(2)用__________技術(shù)可以檢測TPEC細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)的gus蛋白。選取部分細(xì)胞在一定溶液中用________(填酶的名稱)處理后可以獲得原生質(zhì)體。

(3)用黃綠色的異硫氰酸熒光素標(biāo)記荔枝TPEC細(xì)胞的原生質(zhì)體，用紅色的異硫氰酸堿性蕊香紅標(biāo)記龍眼細(xì)胞的原生質(zhì)體。將兩種原生質(zhì)體按1：1的比例在電融儀中誘導(dǎo)融合，原生質(zhì)體融合的原理是________________________________________。

(4)雜種細(xì)胞的篩選工作至關(guān)重要，熒光顯微鏡下篩選雜種細(xì)胞的方法是_______________。

Answer 1

【答案】農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 植物激素、瓊脂 抗原一抗體雜交 纖維素酶和果膠酶 細(xì)胞膜具有一定的流動性 挑選能夠產(chǎn)生黃綠色和紅色兩種熒光的原生質(zhì)體，即雜種細(xì)胞

【解析】

1、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合時可采用化學(xué)法和物理法，采用化學(xué)法誘導(dǎo)時，一般是用聚乙二醇（PEG）作為誘導(dǎo)劑，依據(jù)的原理是細(xì)胞膜的流動性和植物細(xì)胞的全能性。

2、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（約80%的轉(zhuǎn)基因植物都是用這種方法獲得的）：

①農(nóng)桿菌特點：易感染雙子葉植物和裸子植物，對單子葉植物沒有感染力；Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體上；

②轉(zhuǎn)化：目的基因插人Ti質(zhì)粒的T-DNA上進(jìn)入農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→目的基因整合到植物細(xì)胞染色體上→目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)。

3、目的基因的檢測和鑒定：

（1）分子水平上的檢測

①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；

②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；

③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；

（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）將外源基因?qū)�人荔枝愈傷組織通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。培養(yǎng)荔枝愈傷組織的培養(yǎng)基中除了需要添加無機營養(yǎng)成分、有機營養(yǎng)成分外，還需要添加植物激素和瓊脂等。

（2）gus蛋白的檢測方法為抗原一抗體雜交技術(shù)。獲得原生質(zhì)體的方法是用纖維素酶和果膠酶處理荔枝的愈傷組織。

（3）原生質(zhì)體融合的原理是細(xì)胞膜具有一定的流動性。

（4）由于荔枝原生質(zhì)體用黃綠色的異硫瓿酸熒光素標(biāo)記，龍眼原生質(zhì)體用紅色的異硫瓿酸堿性蕊香紅標(biāo)記，熒光顯微鏡下篩選雜種細(xì)胞的方法是挑選能夠產(chǎn)生黃綠色和紅色兩種熒光的原生質(zhì)體，即雜種細(xì)胞。