Question

16．甘藍(lán)自花傳粉后，花粉在雌蕊柱頭上的萌發(fā)受阻會(huì)導(dǎo)致自交不親和，這一甘藍(lán)柱頭細(xì)胞中MLPK基因的表達(dá)有關(guān)．科研人員將反義MLPK基因表達(dá)載體導(dǎo)入甘藍(lán)細(xì)胞，轉(zhuǎn)錄出的反義mRNA與甘藍(lán)細(xì)胞中MLPK基因轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)，阻止mRNA的翻譯，可增加甘藍(lán)自交結(jié)籽數(shù)量．相關(guān)操作過(guò)程如圖所示，回答下列問(wèn)題．  
（1）圖中①表示cDNA（或者互補(bǔ)DNA）；PCR過(guò)程需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶． 
（2）在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)將反義MLPK基因與甘藍(lán)柱頭細(xì)胞中特異表達(dá)的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起． 
（3）科研人員依據(jù)重組載體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，用添加除草劑的培養(yǎng)基篩選出導(dǎo)入載體的甘藍(lán)細(xì)胞．組織培養(yǎng)時(shí)，誘導(dǎo)細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，通過(guò)提高培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素（填“生長(zhǎng)素”或“細(xì)胞分裂素”）的含量誘導(dǎo)再分化和芽原基的形成，最終獲得甘藍(lán)植株．  
（4）要在個(gè)體生物學(xué)水平上鑒定反義MLPK基因是否發(fā)揮作用，方法是統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)植株自花傳粉（或自交）后的結(jié)籽數(shù)量，并與非轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)植株比較．

Answer 1

分析 分析題圖：該過(guò)程首先從甘藍(lán)雌蕊柱頭細(xì)胞提取總RNA，利用反轉(zhuǎn)錄法獲得cDNA（圖中①），在運(yùn)用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，最后利用限制酶和DNA連接酶將反義MLPK基因與質(zhì)粒進(jìn)行重組．
植物組織培養(yǎng)過(guò)程中需要利用生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，其中生長(zhǎng)素能夠促進(jìn)根的分化，而細(xì)胞分裂素能夠促進(jìn)芽的分化．

解答 解：（1）圖中①表示通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法獲得的cDNA（或者互補(bǔ)DNA）；PCR過(guò)程中需要高溫解鏈，因此所運(yùn)用的DNA聚合酶必須是熱穩(wěn)定DNA聚合酶． 
（2）該基因工程的目的是該基因能夠在甘藍(lán)柱頭細(xì)胞中表達(dá)，因此在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，需要應(yīng)將反義MLPK基因與甘藍(lán)柱頭細(xì)胞中特異表達(dá)的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起． 
（3）分析圖中重組質(zhì)�？芍�，該表達(dá)載體上的標(biāo)記基因?yàn)椤翱钩�草劑基因”，因此科研人員需要用添加除草劑的培養(yǎng)基篩選出導(dǎo)入載體的甘藍(lán)細(xì)胞．組織培養(yǎng)時(shí)，誘導(dǎo)細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，通過(guò)提高培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素的含量誘導(dǎo)再分化和芽原基的形成，最終獲得甘藍(lán)植株．  
（4）要在個(gè)體生物學(xué)水平上鑒定反義MLPK基因是否發(fā)揮作用，可以統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)植株自花傳粉（或自交）后的結(jié)籽數(shù)量，并與非轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)植株比較．
故答案為：
（1）cDNA（或者互補(bǔ)DNA）    熱穩(wěn)定DNA聚合酶
（2）甘藍(lán)柱頭
（3）除草劑   愈傷組織   細(xì)胞分裂素
（4）統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)植株自花傳粉（或自交）后的結(jié)籽數(shù)量，并與非轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)植株比較

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠掌握基因工程的操作步驟，識(shí)記目的基因獲取的幾種方法，掌握目的基因檢測(cè)和鑒定的分子水平和個(gè)體水平的方法，并結(jié)合圖示信息準(zhǔn)確答題．