Question

【題目】下圖表示某質(zhì)粒載體，圖2表示植物甲的抗旱基因，該基因兩端分別包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種限制酶的酶切位點。據(jù)圖回答下列問題：

（1）目前獲取目的基因的常用方法有：①從_______________中獲取目的基因；②利用__________擴增目的基因。

（2）若目的基因和質(zhì)粒載體分別用EcoRⅠ酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶處理后，兩兩連接對的產(chǎn)物有_________種類型。將上述連接產(chǎn)物導(dǎo)入無任何抗藥性的宿主細胞中，再將這些宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能正常生長的宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物是__________________________________________________ 。實驗中，為了防止目的基因和質(zhì)粒載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時因選用的酶是_________________。

（3）為大量培養(yǎng)抗旱新品種植物，將基因表達載體構(gòu)建完成后一般不直接導(dǎo)入農(nóng)桿菌，而是先將其轉(zhuǎn)入處于________的大腸桿菌中，導(dǎo)入大腸桿菌的目的是_______________________。

Answer 1

【答案】基因文庫 PCR技術(shù) 3 載體--載體連接物(或質(zhì)粒一質(zhì)粒連接物) EcoR I和BamH I 感受態(tài) 獲取大量重組質(zhì)粒

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）目前獲取目的基因的常用方法有：從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增。

（2）將含有抗旱基因的DNA與該質(zhì)粒表達載體分別用EcoRⅠ酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產(chǎn)物有3種，即含有耐旱基因的DNA與含有耐旱基因的DNA連接、質(zhì)粒與質(zhì)粒連接、含有耐旱基因的DNA與質(zhì)粒連接。由圖可知，構(gòu)建基因表達載體時，四環(huán)素抗性基因會被破壞，因此將上述連接產(chǎn)物導(dǎo)入無任何抗藥性的宿主細胞后，將這些宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能正常生長的宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物是載體-載體連接物（或質(zhì)粒-質(zhì)粒連接物）。酶切時應(yīng)選用限制酶EcoRⅠ和BamHⅠ，形成不同的黏性末端，這樣可以防止目的基因和質(zhì)粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接。

（3）為大量培養(yǎng)抗旱新品種植物，將基因表達載體構(gòu)建完成后一般不直接導(dǎo)入農(nóng)桿菌，而是先將其轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的大腸桿菌中，目的是為了獲取大量重組質(zhì)粒。