Question

13．為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌的分離等工作．回答下列問題：
（1）在制備培養(yǎng)基的過程中，在火焰附近倒平板，等平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置，其主要原因是防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染．
（2）將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，4個平板上的菌落數(shù)分別為26、39、38和37．據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為3.5×10⁷個．在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格．
（3）若要測定培養(yǎng)基中細(xì)菌的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)；若要測定其活菌數(shù)量，可選用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)．
（4）若想長期保存菌種，方法是甘油管藏．

Answer 1

分析 培養(yǎng)基配制時的注意事項(xiàng)：
①全程要求無菌操作，無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還能有效地避免操作者自身被微生物感染．
②培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板．可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，當(dāng)感覺到錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板．操作時應(yīng)使錐形瓶的瓶口通過火焰，以防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基．
③平板冷凝后皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，若將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染．
④在倒平板的過程中，不能將培養(yǎng)基濺到皿蓋與皿底之間的部位，因?yàn)榭諝庵械奈⑸�物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生．

解答 解：（1）在制備培養(yǎng)基的過程中，操作時應(yīng)使錐形瓶的瓶口通過火焰，以防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基．倒平板時要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要原因是防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染，還能促進(jìn)培養(yǎng)基表面水分的揮發(fā)．
（2）微生物培養(yǎng)過程應(yīng)該進(jìn)行無菌操作，配制的培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，可以將滅菌后的空白平板進(jìn)行培養(yǎng)以檢測培養(yǎng)基滅菌是否徹底．由題意知1ml水樣中的菌落數(shù)是（26+39+38+37）÷4÷0.1×100=35000個，每升水樣中的活菌數(shù)為35000×1000=3.5×10⁷．
（3）若要測定稀釋液中的菌體數(shù)可在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)．若要測定其活菌數(shù)量，可選用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)．
（4）為方便后續(xù)年級使用該菌種，可將菌液用甘油管藏的方法長期保存．
故答案為：（1）火焰附近     防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染
（2）3.5×10⁷            檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格
（3）血球計(jì)數(shù)板      稀釋涂布平板
（4）甘油管藏

點(diǎn)評 本題考查微生物分離和培養(yǎng)，要求考生掌握選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)，識記分離和純化微生物常用的兩種方法，掌握采用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物的具體過程，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)．