Question

9．在農(nóng)業(yè)用地中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機化合物 ）在土壤中不易降解，長期使用可污染土壤．為修復被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度一定，該除草劑的培養(yǎng)基不透明）．

（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理．
（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點是：固體培養(yǎng)基且以除草劑作唯一氮源．若需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH，應該在各種成分都溶化后且分裝前（填“前”或“后”）進行．對培養(yǎng)基進行滅菌，常采用的方法是高壓蒸汽滅菌．
（3）培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長的主要原因是培養(yǎng)基中缺少這些細菌可利用的氮源或有氧條件抑制了這些細菌的生長．
（4）在固體培養(yǎng)基上形成的菌落中，無透明帶菌落利用的氮源主要是氮氣，有透明帶菌落利用的氮源主要是該除草劑，據(jù)此可篩選出目的菌．
（5）若要統(tǒng)計某土壤樣品中該活菌數(shù)目，宜采用稀釋涂布平板法．
①測定該菌數(shù)時，在對應稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計結(jié)果，正確可信的是D，理由是在設(shè)計實驗時，一定要涂布至少三個平板，才能增強實驗的說服力與準確性；一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)．
A．一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是230  B．兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是220和260，取平均值240
C．三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是210、50和520，取平均值260
D．四個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是210、300、240和250，取平均值250
②一同學在稀釋倍數(shù)為10⁵的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是2.34×10⁸個（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL）．
③用這種方法測定的大腸桿菌菌落數(shù)比實際活菌數(shù)量少，因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落．

Answer 1

分析 分析題圖：該實驗是從土壤中篩選分離能降解除草劑的微生物的過程．這樣的實驗要將土壤稀釋處理，以除草劑為唯一的氮源進行處理篩選土壤微生物，以菌落計數(shù)法進行統(tǒng)計計數(shù)．

解答 解：（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理．
（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點是：固體培養(yǎng)基且以除草劑作唯一氮源．若需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH，應該在各種成分都溶化后且分裝前進行．對培養(yǎng)基進行滅菌常采用高壓蒸汽滅菌法．
（3）在以該除草劑為唯一氮源的培養(yǎng)基上，不能降解該除草劑的細菌（除具有固氮能力的細菌外）是不能生長的．
（4）根據(jù)題中信息“含除草劑的培養(yǎng)基不透明”，則可知無透明帶菌落利用的氮源并不是除草劑，而是來自空氣中的氮氣，有透明帶菌落利用的氮源為除草劑．
（5）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法還可用于對微生物進行計數(shù)．
①在設(shè)計實驗時，一定要涂布至少三個平板，才能增強實驗的說服力與準確性，而且一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)．
②在稀釋倍數(shù)為10⁵的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234，涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL，因此每毫升樣品中的菌落數(shù)是234÷0.1×10⁵=2.34×10⁸．
③涂布時，當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落，這樣使測定的大腸桿菌菌落數(shù)比實際活菌數(shù)量少．
故答案為：
（1）稀釋  
（2）以除草劑作唯一氮源　前　高壓蒸汽滅菌
（3）培養(yǎng)基中缺少這些細菌可利用的氮源   
（4）氮氣　該除草劑
（5）稀釋涂布平板  
①D　在設(shè)計實驗時，一定要涂布至少三個平板，才能增強實驗的說服力與準確性；一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)　
②2.34×10⁸　
③少　當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落

點評 本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的實驗，意在考查實驗目的、原理、方法和操作步驟，掌握相關(guān)的操作技能，并能將這些實驗涉及的方法和技能進行綜合運用及實驗分析能力．