Question

7．基因工程又稱基因拼接技術(shù)和DNA重組技術(shù)，包括以下幾個環(huán)節(jié)：目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定．回答下列相關(guān)問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即人工合成和從生物材料中分離．如果利用某植物為材料，同時構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩者相比cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少（多/少）．
（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，經(jīng)常使用質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，其應(yīng)具備的基本條件有能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個至多個限制酶切割位點(diǎn)（答出兩點(diǎn)即可）．除滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子．啟動子是RNA聚合酶識別并結(jié)合的部位．這一步驟中通常還會利用到DNA連接酶，常見的有E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是T₄DNA連接酶．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞時，如果受體為植物細(xì)胞，采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，如果受體為動物細(xì)胞，采用最多的方法是顯微注射技術(shù)．
（4）最后，要檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因，經(jīng)常采用的檢測方法是DNA分子雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即人工合成和從生物材料中分離．cDNA文庫和基因文庫的比較表：

文庫類型	cDNA	基因組文庫
文庫大小	小	大
基因中啟動子	無	有
基因中內(nèi)含子	無	有
基因多少	某種生物的部分基因	某種生物的全部基因
物種間的基因交流	可以	部分基因可以

由此客家，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少．
（2）作為基因工程的運(yùn)載體應(yīng)具備的基本條件有：能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個至多個限制酶切割位點(diǎn)等．除滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子，其中啟動子是RNA聚合酶識別并結(jié)合的部位．構(gòu)建基因表達(dá)載體時，需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA，DNA連接酶根據(jù)來源不同分為E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是T₄DNA連接酶．
（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法．
（4）最后，要檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因，經(jīng)常采用DNA分子雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）人工合成    少
（2）能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個至多個限制酶切割位點(diǎn)      RNA聚合     T₄DNA連接酶
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法    顯微注射技術(shù)
（4）DNA分子雜交技術(shù)

點(diǎn)評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能構(gòu)建知識網(wǎng)絡(luò)，再結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．