Question

【題目】【加試題】下列文題有關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答：

（1）配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，根據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和

作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的 。

（2）大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)中，在 中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng) 后，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行 ，并將培養(yǎng)皿 放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以獲得如圖效果。 為了檢測(cè)接種、培養(yǎng)過(guò)程是否受雜菌污染以及 ，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

（3）通常對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù) 的形狀、大小等特征進(jìn)行初步的鑒定。

（4）關(guān)于“大腸桿菌培養(yǎng)和分離”的操作中，下列敘述正確的是（ ）

A．高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后，開(kāi)啟鍋蓋

B．倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上

C．為了防止污染，接種工具精火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落

D．用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上

（5）科學(xué)家利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，利用大腸桿菌生產(chǎn)胰島素，其過(guò)程如下圖。由甲和載體乙拼接形成的丙通常稱為 ，構(gòu)建得到丙時(shí)必需的工具酶有 。在此過(guò)程中，用來(lái)處理丁以增加細(xì)胞壁通透性的化學(xué)試劑是（ ）

A．氯化鈉 B．氯化鈣 C．次氯酸鈉 D．纖維素酶

Answer 1

【答案】（14分，除說(shuō)明外，每空1分）

（1）酵母提取物 NaCl

（2）LB液體培養(yǎng)基 稀釋 涂布分離 倒置 無(wú)菌操作是否規(guī)范

（3）菌落 （4）D（2分） （5）重組質(zhì)粒 限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶 B （2分）

【解析】

試題分析：（1）由題意“細(xì)菌喜葷”可知：該大腸桿菌為異養(yǎng)細(xì)菌，需要的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)取自動(dòng)物性營(yíng)養(yǎng)，因此配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和酵母提取物等作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的NaCl。

（2）大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)中，在LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)稀釋后，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布分離，并將培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以獲得右圖效果。為了檢測(cè)接種、培養(yǎng)過(guò)程是否受雜菌污染以及無(wú)菌操作是否規(guī)范，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

（3）固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物能形成菌落，菌落的形狀、大小、顏色、軟硬等特征可用于菌種的鑒定。

（4）高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，切斷熱源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降到零時(shí)，打開(kāi)放氣閥。旋松螺栓，開(kāi)啟鍋蓋，A項(xiàng)錯(cuò)誤；倒平板時(shí)，左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基導(dǎo)入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，B項(xiàng)錯(cuò)誤；為了防止污染，接種工具精火焰滅菌后應(yīng)在火焰旁冷卻后挑取菌落，C項(xiàng)錯(cuò)誤；用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上，D項(xiàng)正確。

（5）圖中的甲為目的基因，載體乙通常為質(zhì)粒，因此甲和載體乙拼接形成的丙通常為重組質(zhì)粒；構(gòu)建得到重組質(zhì)粒時(shí)必需的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。丁即大腸桿菌為轉(zhuǎn)基因技術(shù)中的受體細(xì)胞，為了增加其細(xì)胞壁的通透性，用于處理的化學(xué)試劑是氯化鈣，即B選項(xiàng)。