Question

逆轉錄病毒載體是一種表達型質粒，結構如圖所示．如圖的“逆轉錄病毒序列”可以整合到動物細胞的染色體上，不斷地表達其攜帶的目的基因，獲得大量重組逆轉錄病毒．（E、F、H分別為限制酶 E、F、H的酶切位點）．
（1）逆轉錄的模板是

 

，原料是

 

．
（2）在構建重組質粒時，目的基因插入該質粒，此過程需要的酶是限制酶

 

和

 

（3）將重組質粒轉人大腸桿菌前用某種離子處理大腸桿菌使之成為

 

才能完成轉化過程．為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加

 

的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)．
（4）獲取大量重組質粒后，可培育轉基因小鼠，將重組質粒導入小鼠受精卵的方法是

 

．若目的基因進人細胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉基因純合子小鼠的方法是

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：分析題圖：圖示為一種表達型質粒的結構示意圖，該質粒含有E、F、H三種限制酶的酶切位點；含有抗生素A抗性基因，可作為標記基因；含有“逆轉錄病毒序列”，該序列可以整合到動物細胞的染色體上，不斷地表達其攜帶的目的基因，獲得大量重組逆轉錄病毒．

解答： 解：（1）逆轉錄是以RNA為模板合成DNA的過程，需要以四種脫氧核苷酸為原料．
（2）根據題干信息“逆轉錄病毒序列可以整合到動物細胞的染色體上，不斷地表達其攜帶的目的基因”可知，在構建重組質粒時，應將目的基因插入該質粒的逆轉錄病毒序列中，因此該過程應選用限制酶F切割質粒和含有目的基因的外源DNA分子，此外還需要DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子．
（3）將目的基因導入微生物細胞時，需用Ca²⁺（或CaCl₂）處理微生物細胞使之成為感受態(tài)細胞（易吸收周圍環(huán)境中的DNA分子）才能完成轉化過程．標記基因是抗生素A抗性基因，因此可用含有抗生素A的培養(yǎng)基篩選含有重組質粒的大腸桿菌．
（4）顯微注射法將目的基因導入動物細胞最有效的方法．若目的基因進人細胞后插入在一條染色體DNA上，則轉基因動物可被看成雜合子，要想獲得轉基因純合子小鼠，可讓轉基因小鼠間相互交配（或雜交）．
故答案為：
（1）RNA   （四種）脫氧核苷酸
（2）F    DNA連接酶
（3）感受態(tài)細胞   抗生素A   
（4）顯微注射法   轉基因小鼠間相互交配（或雜交）

點評：本題結合質粒結構示意圖，考查基因工程、基因分離定律的實質及應用，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，能根據題干信息和圖示信息選擇合適的限制酶；掌握基因分離定律的實質，明確轉基因生物可被視為雜合子，再根據題干要求答題．