Question

為了從動(dòng)物組織中提取純凈的DNA，首先要快速、有效地消化裂解動(dòng)物組織細(xì)胞。消化裂解動(dòng)物組織常用的方法有蛋白酶（如蛋白酶K）水解、表面活性劑處理、變性劑處理等。某科研人員擬使用加酶洗衣粉消化裂解豬肌肉樣本，并提取豬的DNA。實(shí)驗(yàn)步驟如下：

①取500mg剪碎的豬肌肉組織于離心管中，加40mg加酶洗衣粉和1.5mL超純水混合，在一定溫度條件下水浴消化24h。

②加入苯酚、氯仿、異丙醇(25:24:1)混合液抽提。

③加0.2mg/mL的RNA水解酶于37。C水浴th。

④加醋酸鈉和無(wú)水乙醇，4cc高速離心15min。

⑤用70qo乙醇洗滌沉淀兩次，風(fēng)干，得到高純度的DNA。

請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題：

（1）加酶洗衣粉可以消化裂解動(dòng)物組織細(xì)胞的原理是 。

（2）步驟②的目的是 。步驟③的目的是 。

（3）步驟④中使用無(wú)水乙醇的目的是 ，高速離心時(shí)溫度保持在4℃的原因有 、 等。

（4）如果要將加酶洗衣粉法提取DNA與蛋白酶K法提取DNA的效果進(jìn)行對(duì)比，請(qǐng)簡(jiǎn)要說(shuō)明實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路。 。

（5）若是從血細(xì)胞中提取DNA，則選擇 （選填“雞血”或“哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞”）。破碎細(xì)胞時(shí)，向血細(xì)胞液中加入一定量的 ，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液即可。

 

Answer 1

（1）洗衣粉中蛋白酶和表面活性劑等可以破壞細(xì)胞膜

（2）使蛋白質(zhì)變性，抽提蛋白質(zhì) 水解RNA

（3）析出DNA，提取含雜質(zhì)較少的DNA 降低核酸水解酶的活性，防止DNA降解

降低分子運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出（增加DNA分子的柔韌性，減少斷裂）

（4）將上述實(shí)驗(yàn)步驟中的加酶洗衣粉換成蛋白酶K，其他實(shí)驗(yàn)步驟相同，得到DNA后，測(cè)定DNA的量、純度

（5）雞血 蒸餾水

【解析】

試題分析：

（1）細(xì)胞膜被破壞可導(dǎo)致細(xì)胞裂解，由于細(xì)胞膜中含有蛋白質(zhì)，所以蛋白酶可以促進(jìn)細(xì)胞裂解，另外，表面活性劑也可以破壞細(xì)胞膜。

（2）苯酚、氯仿、異丙醇混合液可以促進(jìn)蛋白質(zhì)變性，便于抽提；RNA水解酶可以水解RNA。

（3）DNA在無(wú)水乙醇中的溶解度很低，利用無(wú)水乙醇可以析出純度更高的DNA；高速離心時(shí)要保持低溫，原因是：可以降低水解酶的活性，防止DNA被水解；還可以降低分子運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出。

（4）實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖茄芯康鞍酌窴提取DNA的效果，因此應(yīng)將上述實(shí)驗(yàn)中的加酶洗衣粉換成蛋白酶K，其他實(shí)驗(yàn)步驟相同，得到DNA后，測(cè)定DNA的量、純度。

（5）因?yàn)椴溉閯?dòng)物的成熟的紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核，不能提取出DNA分子，因此應(yīng)選用雞血；破碎細(xì)胞時(shí)，可以加入一定量的蒸餾水，細(xì)胞會(huì)吸水漲破，內(nèi)容物流出。

考點(diǎn)：本題考查DNA的提取的有關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系的能力；具備驗(yàn)證簡(jiǎn)單生物學(xué)事實(shí)的能力，并能對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和結(jié)果進(jìn)行解釋、分析和處理。