Question

5．下面是生物研究小組對4 種不同品牌腐乳產(chǎn)蛋白酶菌株進行篩選的方案，請協(xié)助完成方案，并回答有關(guān)問題：
【實驗原理】在固體培養(yǎng)基中加入溶解性差、但可被微生物利用的酪蛋白可以形成渾濁、不透明的培養(yǎng)基背景．當培養(yǎng)基中的酪蛋白被微生物分泌的蛋白酶分解后，在菌落（沉淀圈）的周圍就會形成透明圈（如圖1）．透明圈的大小反映了菌落利用蛋白質(zhì)的能力．

【材料與試劑】4種品牌的豆腐乳（編號品牌1、2、3、4）
【主要儀器與設(shè)備】恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋等
【實驗方法】
Ⅰ、制備固體平板培養(yǎng)基：計算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板．
Ⅱ、運用稀釋涂布平板法分離純化菌株：分別梯度稀釋制備4種腐乳的菌懸液，吸取少量的菌懸液，注入培養(yǎng)基平板中，涂布均勻．然后置于溫度28℃的恒溫箱中，培養(yǎng)36h．
Ⅲ、初篩菌種：從上一步培養(yǎng)基平板上挑選單細胞菌落，分別接種于篩選培養(yǎng)基中，在28℃下培養(yǎng)48h．挑選透明圈大而沉淀圈小的菌株，作為初篩菌株．
回答下列問題：
（1）補全“制備微生物固體培養(yǎng)基”的主要操作步驟①滅菌，②倒平板．
（2）“菌落”在生態(tài)學上屬于種群層次的生命系統(tǒng)，“稀釋涂布平板法”純化菌種的原理是在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將分散成單個細胞，從而能夠在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落．在進行菌種純化時，還可以采用平板劃線法進行．
（3）初篩菌株的菌落周圍“透明圈大”說明沉淀圈中的微生物分泌的蛋白酶活性越高．
（4）研究人員將初篩菌株接種于發(fā)酵液中，在適宜條件下培養(yǎng)，并每隔一定時間取樣檢測發(fā)酵液中蛋白酶的活性，結(jié)果如圖2：
根據(jù)曲線可知，在培養(yǎng)的早期，各品牌菌種發(fā)酵液中蛋白酶活性都迅速升高，這可能與時間有關(guān)，研究中最好選擇哪一品牌的菌種作為高產(chǎn)蛋白酶的菌株品牌1．

Answer 1

分析 培養(yǎng)基的制作流程一般為：計算→稱量→溶化（包括瓊脂）→調(diào)節(jié)PH→分裝→滅菌→倒平板→（冷卻后）倒置平板；
淀粉分解菌可以產(chǎn)生淀粉酶，在鑒別培養(yǎng)基上，淀粉分解菌的菌落周圍形成透明圈，一定范圍內(nèi)淀粉酶越多，活性越高，透明圈越大，對菌株生存越有利．

解答 解：（1）制備固體培養(yǎng)基的操作順序為計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．
（2）“一個菌落”是同種細菌的群體，在生態(tài)學中屬于一個種群．稀釋涂布平板法依據(jù)的原理是在稀釋度足夠高的菌液里，將聚集在一起的菌種分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落．在進行菌種純化時，還可以采用平板劃線法進行．
（3）淀粉分解菌可以產(chǎn)生淀粉酶，在鑒別培養(yǎng)基上，淀粉分解菌的菌落周圍形成透明圈，一定范圍內(nèi)淀粉酶越多，活性越高，透明圈越大，對菌株生存越有利．
（4）圖中四個品牌，隨著時間的推移，活性迅速增加，最終品牌1穩(wěn)定在較高的水平上．
故答案為：
（1）滅菌   倒平板
（2）種群  單個細胞  平板劃線
（3）越高
（4）時間   品牌1

點評 本題主要考查微生物的類群和微生物培養(yǎng)等知識，重點考查學生的實驗分析能力，難度適中．