Question

14．人血清白蛋白（HSA） 具有重要的醫(yī)用價(jià)值，只能從血漿中制備．如圖1是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑．

（1）為獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取總RNA（或mRNA）合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因．如圖2中箭頭箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，請(qǐng)用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向．

（2）啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動(dòng)子是B（填寫字母，單選）．
A．人血細(xì)胞啟動(dòng)子   B．水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子  C．大腸桿菌啟動(dòng)子 D．農(nóng)桿菌啟動(dòng)子
（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需添加酚類物質(zhì)，其目的是吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化．
（4）人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才能有活性．與途徑Ⅱ相比，選擇途徑I獲取rHSA的優(yōu)勢(shì)是水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對(duì)初始rHSA多肽進(jìn)行高效加工．
（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價(jià)值，須確認(rèn)rHSA與HSA的生物學(xué)功能一致．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測(cè)與鑒定：（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）為獲取HSA基因，可通過反轉(zhuǎn)錄法，首先需采集人的血液，提取合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因．由于DNA兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械�，�?fù)制時(shí)也是方向相反，如圖2中箭頭箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，則另一條引物位于另一條鏈的相反一端．如圖所示
．
（2）啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，故若構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動(dòng)子是水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子．
（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需添加酚類物質(zhì)，其目的是吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化．
（4）由于大腸桿菌為原核生物，無生物膜系統(tǒng)，而水稻為真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，故在人體合成的初始HSA多肽，與途徑Ⅱ相比，選擇途徑I獲取rHSA的優(yōu)勢(shì)是 水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對(duì)初始rHSA多肽進(jìn)行高效加工．
（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價(jià)值，需對(duì)基因工程的產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，即確認(rèn)rHSA與HSA的生物學(xué)功能一致．
故答案為：
（1）總RNA （或mRNA）

（2）B
（3）吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化
（4）水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對(duì)初始rHSA多肽進(jìn)行高效加工
（5）HSA

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．