Question

【題目】 為了增加菊花花色類型，研究者獲取其他植物的花色基因C，將其與質(zhì)粒重組為基因表達(dá)載體，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中�；卮鹣铝袉�(wèn)題。

（1）獲取花色素基因C的方法有_____（答出一條即可）。將花色素基因C與質(zhì)粒構(gòu)建為基因表達(dá)載體時(shí)需要用到的工具酶有_____。

（2）基因表達(dá)載體中必須含有標(biāo)記基因。標(biāo)記基因的作用是_____。

（3）除農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法外，還可以采用_____等方法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入菊花中。

（4）目的基因?qū)�入受體細(xì)胞后，可以采用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)C基因是否整合到菊花的DNA上。請(qǐng)簡(jiǎn)要描述檢測(cè)的操作過(guò)程：_____。

（5）檢測(cè)基因C是否翻譯成蛋白質(zhì)，是從轉(zhuǎn)基因菊花中提取出蛋白質(zhì)，進(jìn)行_____雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，表明基因C已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。

Answer 1

【答案】從基因文庫(kù)中獲取目的基因或利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶 鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而篩選出含有目的基因的細(xì)胞 基因槍法或者花粉管通道法 提取出轉(zhuǎn)基因菊花的基因組，將花色素基因C用同位素等標(biāo)記作為探針，使探針與基因組雜交 抗原﹣抗體

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）獲取目的基因的方法有：從基因文庫(kù)中獲取目的基因、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因；構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要用限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA。

（2）標(biāo)記基因的作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而篩選出含有目的基因的細(xì)胞。

（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞可采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法或者花粉管通道法。

（4）檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，可采用DNA分子雜交技術(shù)，過(guò)程為：提取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組，將目的基因用同位素等標(biāo)記作為探針，使探針與基因組雜交。

（5）檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，可采用抗原-抗體雜交法，即從轉(zhuǎn)基因菊花中提取出蛋白質(zhì)，進(jìn)行抗原-抗體雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。