Question

家蠶細胞具有高效表達外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)�入家蠶細胞并大規(guī)模培養(yǎng),可提取干擾素用于制藥。

(1)進行轉(zhuǎn)基因操作前,需用 酶短時處理幼蠶組織,以便獲得單個細胞。

(2)為使干擾素基因在家蠶細胞中高效表達,需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達載體的 和 之間。

(3)采用PCR技術可驗證干擾素基因是否已經(jīng)導入家蠶細胞。該PCR反應體系的主要成分應包含:擴增緩沖液(含Mg2+)、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、 和 。

(4)利用生物反應器培養(yǎng)家蠶細胞時,貼壁生長的細胞會產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應器中,這樣可以 增加培養(yǎng)的細胞數(shù)量,也有利于空氣交換。

 

Answer 1

(1)胰蛋白(或膠原蛋白) (2)啟動子 終止子

(3)對干擾素基因特異的DNA引物 Taq DNA聚合酶 (4)擴大細胞貼壁生長的附著面積

【解析】(1)利用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動物組織可獲得單個細胞。(2)來自cDNA文庫中的目的基因不含復制原點、標記基因、啟動子和終止子等,故需將該目的基因插入到啟動子和終止子之間。(3)PCR技術是在體外高溫條件下進行的,需利用熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(如Taq DNA聚合酶)。由于DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸連接在一個片段上,所以在PCR反應體系中還需加入引物。(4)據(jù)題意可知,反應器中放入多孔中空薄壁小玻璃珠可擴大細胞貼壁生長的附著面積,有利于細胞增殖。