Question

【題目】嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶，開(kāi)展了以下試驗(yàn)。（圖中啟動(dòng)子與RNA聚合酶結(jié)合，終止子是給予RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列）

（1）______擴(kuò)增bglB基因時(shí)，選用嗜熱土壤芽孢桿菌基因組DNA作模板。

（2）如圖為質(zhì)粒限制性核酸內(nèi)切酶切圖譜，為使獲得的bglB基因與質(zhì)粒載體連接，bglB基因兩端需分別含有______和______不同限制酶的識(shí)別序列

（3）將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，為了促進(jìn)該過(guò)程，應(yīng)該用氯化鈣處理大腸桿菌，其目的是______。

（4）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)?/span>______。

（5）下列有關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶的敘述中正確的是______

A．用限制性核酸內(nèi)切酶切割一個(gè)DNA分子中部，獲得一個(gè)目的基因時(shí)，被水解的磷酸二酯鍵有2個(gè)

B．限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別的序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大

C．-CATG↓-和一G↓GATCC--序列被限制性核酸內(nèi)切酶切出的粘性末端堿基數(shù)不同

D．只有用相同的限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，才能形成重組質(zhì)粒

Answer 1

【答案】PCR NdeⅠ BamHⅠ 增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性 轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶 B

【解析】

基因工程的一般步驟：提取目的基因；目的基因與運(yùn)載體結(jié)合；將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；目的基因的檢測(cè)和表達(dá)。

（1）PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因。

（2）圖中質(zhì)粒上有多個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)，但用PstⅠ切割會(huì)破壞抗生素抗性基因（標(biāo)記基因），用KpnⅠ切割會(huì)破壞復(fù)制原點(diǎn)，用XbaⅠ切割會(huì)去除終止子，用EcoRⅠ切割會(huì)破壞終止子，用HindⅠ切割會(huì)破壞啟動(dòng)子，為使獲得的bglB基因與質(zhì)粒載體連接，為了防止目的基因和運(yùn)載體自身環(huán)化，應(yīng)該用兩種限制酶切割，則bglB基因兩端需分別含有NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的識(shí)別序列。

（3）將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，為了促進(jìn)該過(guò)程，應(yīng)該用氯化鈣處理大腸桿菌，其目的是增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性，是大腸桿菌處于感受態(tài)。

（4）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)檗D(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶。

（5）A、用限制性核酸內(nèi)切酶切割一個(gè)DNA分子中部，獲得一個(gè)目的基因時(shí)，被水解的磷酸二酯鍵有4個(gè)，A錯(cuò)誤；

B、限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別的序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大，B正確；

C、-CATG↓-和一G↓GATCC--序列被限制性核酸內(nèi)切酶切出的粘性末端堿基數(shù)相同，都是4個(gè)，C錯(cuò)誤；

D、用不同的限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，也能形成重組質(zhì)粒，D錯(cuò)誤