Question

15．某實(shí)驗(yàn)小組欲從土壤中篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟如下，請(qǐng)給予合理的補(bǔ)充．
（1）采樣與培養(yǎng)：將采集的土樣混勻后稱取1g，置于經(jīng)過滅菌處理的液體（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基中，28℃振蕩培養(yǎng)．
（2）接種與選擇：為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行系列稀釋處理．之后，將菌液涂布接種于以淀粉為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，30℃條件下培養(yǎng)．為避免污染，需將培養(yǎng)皿呈倒置狀態(tài)放置．此外，為排除其他因素的影響，提高實(shí)驗(yàn)可信度，本步驟需設(shè)計(jì)未接種的空白培養(yǎng)基作為空白對(duì)照．在接種之前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌溫度為121℃．
（3）篩選與純化：將適量的碘液滴加在平板中的菌落周圍，如果菌落周圍的現(xiàn)象是出現(xiàn)透明圈/不變藍(lán)，則說明此菌種能夠分泌淀粉酶使淀粉水解．從平板
中挑取實(shí)驗(yàn)效果明顯的目的菌株，采用平板劃線法接種于新的培養(yǎng)基平板，可對(duì)菌株進(jìn)行進(jìn)一步的純化．

Answer 1

分析 1、從土壤中分離目的微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．
2、培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，富集培養(yǎng)可以使用液體培養(yǎng)基．
3、選擇培養(yǎng)基是指通過培養(yǎng)混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要的種類在這種培養(yǎng)基上是不能生存的．如篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌必須使用以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基．

解答 解：（1）為了擴(kuò)大土壤中的目的菌的數(shù)量，要在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，液體培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌．
（2）為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高而不能形成單菌落，需將培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋；然后菌液涂布接種于以淀粉為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)為避免污染，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放置．此外，為排除其他因素的影響，提高實(shí)驗(yàn)可信度，本步驟需設(shè)計(jì)未接種的空白培養(yǎng)基作為空白對(duì)照．在接種之前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌溫度為121℃．
（3）碘遇淀粉變藍(lán)色，將適量的碘液滴加在平板中的菌落周圍，如果菌落周圍象出現(xiàn)透明圈，則說明此種菌能夠分泌淀粉酶使淀粉水解；挑取透明圈大的菌落采用平板劃線法接種于新的培養(yǎng)基上對(duì)菌種進(jìn)行進(jìn)一步純化．
故答案為：
（1）液體
（2）系列稀釋（或“梯度稀釋”）    　淀粉   　倒置
未接種的空白培養(yǎng)基（或“接種等量無菌水的培養(yǎng)基”）      高壓蒸汽     121℃
（3）出現(xiàn)透明圈/不變藍(lán)　   分泌淀粉酶使淀粉水解    　平板劃線

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記無菌技術(shù)，掌握不同的滅菌方法，能在不同情況下選擇合理的滅菌方法；識(shí)記實(shí)驗(yàn)室分離微生物的方法，能根據(jù)要求完善實(shí)驗(yàn)步驟，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．