Question

16．回答下列有關(guān)微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的有關(guān)問題．
Ⅰ為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分見下表：“+”表示有，“-”表示無）．（注：在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅（CR）時(shí)，CR可與纖維素形成紅色復(fù)合物．）

	酵母膏	無機(jī)鹽	淀粉	纖維素粉	瓊脂	CR溶液	水
培養(yǎng)基甲	+	+	+	+	-	+	+
培養(yǎng)基乙	+	+	+	-	+	+	+

（1）據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲不能（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是液體培養(yǎng)基不能分離單菌落；培養(yǎng)基乙不能（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是乙培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會(huì)形成CR-纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌．
（2）纖維素酶是一類酶，包括C₁酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三種．
Ⅱ?yàn)榱苏{(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌的分離等工作．

（3）圖甲所示的是制備固體培養(yǎng)基時(shí)的實(shí)驗(yàn)操作步驟之一，它稱為倒平板，若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、氧氣、pH、無菌、滲透壓等 等條件．培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染．對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生．
（4）圖乙是平板劃線法接種操作示意圖，正確的操作順序是A→B→G→F→E→C→D→H （用字母和箭頭表示）；找出圖乙中兩處錯(cuò)誤的操作（用字母表示）C、D．
（6）圖丙是某同學(xué)用平板劃線法接種后的培養(yǎng)基培養(yǎng)12h后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果．若該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量，在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37．據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為3.8×10⁷．

Answer 1

分析 1、平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環(huán)，按無菌操作法挑取少量菌種．
②劃A區(qū)：將平板倒置于煤氣（酒精）燈旁，左手拿出皿底并盡量使平板垂直于桌面，有培養(yǎng)基一面向著煤氣燈（這時(shí)皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁），右手拿接種環(huán)先在A區(qū)劃3-4條連續(xù)的平行線（線條多少應(yīng)依挑菌量的多少面定）．劃完A區(qū)后應(yīng)立即燒掉環(huán)上的殘菌，以免因菌過多而影響后面各區(qū)的分離效果．在燒接種環(huán)時(shí)，左手持皿底并將其覆蓋在皿蓋上方（不要放入皿蓋內(nèi)），以防止雜菌的污染．
③劃其他區(qū)：將燒去殘菌后的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基邊緣冷卻一下，并使B區(qū)轉(zhuǎn)到上方，接種環(huán)通過A區(qū)（菌源區(qū)）將菌帶到B區(qū)，隨即劃數(shù)條致密的平行線．再?gòu)腂區(qū)作C區(qū)的劃線．最后經(jīng)C區(qū)作D區(qū)的劃線，D區(qū)的線條應(yīng)與A區(qū)平行，但劃D區(qū)時(shí)切勿重新接觸A、B區(qū)，以免極該兩區(qū)中濃密的菌液帶到D區(qū)，影響單菌落的形成．隨即將皿底放入皿蓋中．燒去接種環(huán)上的殘菌．
④等平板凝固后，將平板倒置．
2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．

解答 解：（1）分析表格可知，培養(yǎng)基甲為液體培養(yǎng)基，不能用于分離和鑒別纖維素分解菌，纖維素分解菌鑒別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基．乙培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會(huì)形成CR-纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌，因此乙培養(yǎng)基也不能用于分離和鑒別纖維素分解菌．
（2）纖維素酶是一類酶，包括C₁酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三種．
（3）制備固體培養(yǎng)基的步驟為：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，圖甲所示為倒平板過程；若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、氧氣、pH、無菌、滲透壓等條件．培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染，對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生．
（4）圖乙是平板劃線法接種操作示意圖，根據(jù)以上分析可知，正確的操作順序是A→B→G→F→E→C→D→H；圖乙中兩處錯(cuò)誤：C步驟應(yīng)該在酒精燈的火焰旁進(jìn)行；D中最后一區(qū)的劃線不能與第一區(qū)相連．
（6）圖丙采用的接種方法是平板劃線法；若該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量，在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37．據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為$\frac{39+38+37}{3}$×100×10×10³=3.8×10⁷．
故答案為：
（1）不能       液體培養(yǎng)基不能分離單菌落     不能     乙培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會(huì)形成CR-纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌
（2）葡萄糖苷酶
（3）倒平板  溫度、氧氣、pH、無菌、滲透壓等
（4）將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生
（5）G→F→E→C→D→H      C、D
（6）平板劃線法     檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格       3.8×10⁷

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖表，考查微生物的培養(yǎng)和分離，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的成分、種類及作用；識(shí)記微生物接種常用的兩種方法，能結(jié)合圖中和表中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．