Question

7．某化工廠的污水池中含有一種難以降解的有害有機化合物A．研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素和水配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細菌（目的菌）．實驗的主要步驟如圖所示，請分析回答下列問題．

（1）目的菌生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的化合物A，實驗需要振蕩培養(yǎng)，由此推測目的菌的代謝類型是異養(yǎng)需氧型．
（2）培養(yǎng)若干天后，應(yīng)選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量最少的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，使目的菌的數(shù)量增多．
（3）轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時，常采用平板劃線法和稀釋涂布平板法進行接種．平板劃線法所使用的工具稱接種環(huán)（針）這種工具操作時應(yīng)采用的滅菌方法是灼燒滅菌．接種時，在第二次及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線．
（4）某同學(xué)將污水樣液制成了10^-1〜10^-4的四個稀釋樣液，分別取0.1mL接種到4組（每組4個）固體選擇培養(yǎng)基上，若在10^-3組的4個平板上，獲得的菌落數(shù)是257、39、38和37，則每升污水樣液中的活菌數(shù)約為3.8×10⁸個．
（5）在上述實驗操作過程中，獲得純凈目的菌的關(guān)鍵是防止外來雜菌的污染．若要將獲得的純凈目的菌種進行長期保存，常采用甘油管藏法．

Answer 1

分析 分析題干信息：該實驗的目的是篩選出高效降解化合物A的細菌，在以化合物A為唯一碳源的培養(yǎng)基中只有能降解化合物A的微生物才能以化合物A為碳源和氮源生長繁殖，不能利用化合物A的微生物因缺乏碳源和氮源，無法生長繁殖；分解化合物A的微生物是需氧微生物，因此在培養(yǎng)過程中應(yīng)該振蕩培養(yǎng)，增加培養(yǎng)液中的溶氧量滿足微生物對氧氣的需求；對于培養(yǎng)基應(yīng)該進行高壓蒸汽滅菌，徹底殺滅包括芽孢在內(nèi)的一切微生物，檢驗培養(yǎng)基滅菌是否徹底的方法是對不接著菌種的空白培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，看是否會長出菌落．實驗結(jié)束時應(yīng)該將使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進行滅菌處理才能倒掉，防止污染環(huán)境．

解答 解：（1）培養(yǎng)基的基本成分包括碳源、氮源、水和無機鹽，該培養(yǎng)基由化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制而成，因此化合物A為目的菌提供了碳源和氮源；在培養(yǎng)過程中振蕩培養(yǎng)的目的是增加培養(yǎng)液中的溶氧量，以滿足微生物對氧氣的需求，這說明目的菌的新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型．
（2）化合物A為目的菌提供了碳源和氮源，因此培養(yǎng)若干天后，應(yīng)選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量最少的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，使目的菌的數(shù)量增多．
（3）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法．平板劃線法所使用的工具是接種環(huán)，對其滅菌應(yīng)該采用灼燒滅菌法．接種時，在第二次及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線．
（4）取0.1mL接種到4組（每組4個）固體選擇培養(yǎng)基上，若在10^-3組的4個平板上，獲得的菌落數(shù)是257、39、38和37，其中第一個平板上數(shù)據(jù)與其他相差較大，不能用于計數(shù)，則每升污水樣液中的活菌數(shù)約為$\frac{39+38+37}{3}{×10}^{3}×\frac{1}{0.1}{×10}^{3}$=3.8×10⁸個．
（5）在上述實驗操作過程中，獲得純凈目的菌的關(guān)鍵是防止外來雜菌的污染．若要將獲得的純凈目的菌種進行長期保存，常采用甘油管藏法．
故答案為：
（1）化合物A     異養(yǎng)需氧型
（2）最少
（3）稀釋涂布平板法      接種環(huán)（針）      灼燒滅菌       上一次劃線的末端
（4）3.8×10⁸
（5）防止外來雜菌的污染  甘油管藏

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記接種微生物常用的兩種方法；識記無菌技術(shù)及菌種保藏方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準確答題．