Question

19．為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上轉(zhuǎn)運(yùn)肽的基因相連，導(dǎo)入油菜葉片細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．

（1）如圖，選用圖中的限制酶ClaⅠ處理兩個(gè)基因后再用DNA連接酶酶處理，得到A和D（填圖中字母）端相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入右圖所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建基因表達(dá)載體并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．
（3）將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．
（4）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法法將目的基因?qū)�入油菜葉片中，并通過(guò)篩選獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞，通過(guò)植株組織培養(yǎng)技術(shù)可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．

Answer 1

分析 基因文庫(kù)包括cDNA文庫(kù)、基因組文庫(kù)等．某個(gè)群體包含一種生物所有的基因的文庫(kù)叫基因組文庫(kù)，而用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA片段屬于cDNA文庫(kù)．

解答 解：（1）兩個(gè)基因都含有ClaⅠ限制酶識(shí)別位點(diǎn)，因此可以用ClaⅠ限制酶切割處理兩個(gè)基因后，再用DNA連接酶鏈接，得到A、D端相連的融合基因．
（2）Ti質(zhì)粒的T-DNA可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的染色體上，穩(wěn)定遺傳，因此，將上述融合基因插入右圖所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建表達(dá)載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．
（3）重組質(zhì)粒中含有四環(huán)素抗性基因，可以篩選出含有轉(zhuǎn)基因的菌落，因此，將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．
（4）受體細(xì)胞是植物細(xì)胞，此過(guò)程常用利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞．該細(xì)胞再通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
故答案為：
（1）ClaⅠDNA連接酶  A和D
（2）T-DNA   基因表達(dá)載體
（3）四環(huán)素
（4）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法  植株組織培養(yǎng)

點(diǎn)評(píng) 本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)圖能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力．