Question

【題目】乙型腦炎病毒（JEV）是一種RNA病毒，E蛋白參與病毒復(fù)制過程。研究人員利用基因重組的方法構(gòu)建了兩種新型JEV疫苗：DNA疫苗和E蛋白疫苗，其流程如下圖所示。請回答下列相關(guān)問題：

（1）過程①需要的酶為__________________。利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增E蛋白基因的原理是_____________，原料為__________________。與體內(nèi)DNA復(fù)制相比，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增E蛋白基因不需要_________________酶。

（2）若將重組質(zhì)粒EN導(dǎo)入的受體細(xì)胞為大腸桿菌，則通常需要用CaCl2溶液處理大腸桿菌，使之成為________________細(xì)胞。將重組質(zhì)粒EN導(dǎo)入大腸桿菌和酵母菌時(shí)，所形成的E蛋白結(jié)構(gòu)不完全相同，其原因是__________________。

（3）E蛋白基因和M質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒EM的過程所涉及的工具酶有_____________________， 這些工具酶作用的化學(xué)鍵為__________________。經(jīng)過重組質(zhì)粒EM產(chǎn)生的DNA疫苗進(jìn)入人體后，會導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生___________________（填“特異性免疫”或“非特異性免疫”），從而達(dá)到預(yù)防乙型腦炎的目的。

Answer 1

【答案】逆（反）轉(zhuǎn)錄酶 DNA 雙鏈復(fù)制 dATP 、dGTP、dCTP 、dTTP 解旋 感受態(tài) 大腸桿菌是原核生物，無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器，無法對蛋白質(zhì)進(jìn)--步加工；酵母菌是真核生物，可以對核糖體形成的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和修飾 限制酶和DNA連接酶 磷酸二酯鍵 特異性免疫

【解析】

1、分析圖可知，①過程為逆轉(zhuǎn)錄，②過程為重組質(zhì)粒的構(gòu)建，③過程為目的基因?qū)�入受體細(xì)胞。

2、基因工程的工具酶：限制酶和DNA連接酶。

3、將目的基因?qū)�入大腸桿菌細(xì)胞，最常用的轉(zhuǎn)化方法是用Ca2+處理大腸桿菌，使之成為感受態(tài)細(xì)胞。

（1）過程①為逆轉(zhuǎn)錄過程，該過程需要逆（反）轉(zhuǎn)錄酶；PCR技術(shù)擴(kuò)增基因的原理是DNA雙鏈復(fù)制，原料為4種dNTP；通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)利用高溫打開雙鏈，不需要使用解旋酶。

（2）受體細(xì)胞若為細(xì)菌等微生物，則通常需要用CaCl2溶液處理大腸桿菌，使之成為感受態(tài)細(xì)胞；大腸桿菌只有核糖體一種細(xì)胞器，無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無法對蛋白質(zhì)進(jìn)一步加工，而酵母菌是真核生物可以對核糖體形成的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和修飾。

（3）構(gòu)建重組質(zhì)粒所涉及的工具酶有限制酶和DNA連接酶，作用的化學(xué)鍵為磷酸二酯鍵；DNA疫苗進(jìn)入人體后，會通過轉(zhuǎn)錄和翻譯過程產(chǎn)生抗原，引起機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫。