Question

【題目】苯酚及其衍生物廣泛存在于廢水中，對環(huán)境有嚴(yán)重危害。下列是某興趣小組從處理工業(yè)廢水的活性污泥中分離篩選酚類降解菌株的流程。

請回答下列問題：

（1）富集培養(yǎng)基中需要加入蛋白胨、K2HPO4，MgSO4，苯酚和水等物質(zhì)，其中可作為碳源的有_____，富集培養(yǎng)的目的：_____________________。

（2）利用苯酚與FeCl3顯紫色制成鑒別培養(yǎng)基，將篩選得到的菌株采用___________法接種到該培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)一段時間，得到如左下圖所示結(jié)果，你認(rèn)為，菌株____降解酚類物質(zhì)能力最強(qiáng)，你的判斷依據(jù)______________________。

序號	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ
稀釋度103倍	5	6	3
稀釋度102倍	43	39	35
稀釋度101倍	418	511	389

（3）為測定活性污泥中酚類降解菌的數(shù)量，取10 g活性污泥，配制成100mL樣液于錐形瓶內(nèi)，充分搖勻，而后再進(jìn)行系列稀釋操作，得到101、102、103倍的稀釋液，并依次分別吸取0.1 mL進(jìn)行平板涂布操作。在適宜條件下培養(yǎng)，當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，對各稀釋度涂布的三個平板進(jìn)行菌落計數(shù)(如上表)。則每克活性污泥中酚類降解菌的數(shù)量為____個。

Answer 1

【答案】蛋白胨和苯酚 增加苯酚降解菌的數(shù)量，以保證能從樣品中分離得到目的菌 稀釋涂布平板法 ① 菌落相對較小而降解圈較大（或降解圈面積最大） 3.9105

【解析】

1.微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是起單一方面的作用。

2.稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。由于兩個或多個細(xì)胞連在一起，觀察到的只是一個菌落，因此其統(tǒng)計的數(shù)值往往比實際數(shù)目偏低。在統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)時一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。

（1）富集培養(yǎng)基的培養(yǎng)基中含有蛋白胨、K2HPO4，MgSO4，苯酚和水等物質(zhì)，其中蛋白胨和苯酚可作為碳源，這里通過富集培養(yǎng)能增加苯酚降解菌的數(shù)量，從而能保證從樣品中成功分離得到目的菌。

（2）利用苯酚與FeCl3顯紫色的特性可制成鑒別培養(yǎng)基，將篩選得到的菌株用稀釋涂布平板法接種到該培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)一段時間，得到如左下圖的結(jié)果，若菌株具有降解酚類物質(zhì)能力且表現(xiàn)的最強(qiáng)，則應(yīng)該能降解并能更多的降解培養(yǎng)基中的苯酚物質(zhì)，從而出現(xiàn)透明圈，且透明圈越大表示降解能量越強(qiáng)，即圖中的①為目標(biāo)菌，因為這一菌落相對較小而降解圈較大（或降解圈面積最大）。

（3）為測定活性污泥中酚類降解菌的數(shù)量，取10 g活性污泥，配制成100mL樣液于錐形瓶內(nèi)，充分搖勻，而后再進(jìn)行梯度稀釋，得到101、102、103倍的稀釋液，并依次分別吸取0.1 mL進(jìn)行平板涂布操作。在適宜條件下培養(yǎng)，當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，對各稀釋度涂布的三個平板進(jìn)行菌落計數(shù)，結(jié)合分析，根據(jù)表中數(shù)據(jù)需要選擇稀釋度為102倍的計數(shù)結(jié)果進(jìn)行計算。則每克活性污泥中酚類降解菌的數(shù)量為（43+35+39）÷3÷0.1×102×10=3.9105個（這里的1克土壤相當(dāng)于10mL培養(yǎng)液）。