Question

1．科研人員通過基因工程實現了β-甘露聚糖酶基因在豬腸道野生酵母菌中的表達，使原來不能被豬利用的粗纖維在豬腸道內被分解成可直接吸收的單糖．圖為構建工程菌的部分過程，其中介導序列能引導載體整合到酵母菌的染色體DNA上．請結合相關知識，回答下列問題：

（1）利用PCR技術從野生酵母菌染色體DNA中獲取目的基因的前提是利用一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物．
（2）如表為四種限制酶的識別序列和切割位點，用表中四種限制酶切割DNA，能得到相同的黏性末端的是限制酶BamHⅠ和BglⅡ．

限制酶	識別序列和切割位點
EcoR I	↓ GAATTC
BamH I	↓ GGATCC
BglⅡ	↓ AGATCT
Sal I	↓ GTCGAC

（3）在構建介導序列質粒載體時，選用EcoR I和BamH I同時切割質粒和介導序列的目的是避免質粒和介導序列發(fā)生自身環(huán)化．
（4）在構建重組表達載體時，引入啟動子的目的是驅動目的基因轉錄出mRNA．
（5）對重組表達載體進行酶切鑒定，假設所用的酶均可將識別位點完全切開．若使用EcoR I和Sal I酶切，將得到3種DNA片斷．

Answer 1

分析 根據題意和圖示分析可知：圖示為構建工程菌的部分過程，其中①表示采用PCR技術擴增介導序列的過程；②是用DNA連接酶將質粒載體與介導序列連接形成重組質粒的過程；③表示用DNA連接酶將質粒載體、介導序列質粒載體和克隆載體重新組成形成重組表達載體．

解答 解：（1）利用PCR技術從野生酵母菌染色體DNA中獲取目的基因的前提是利用一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物．
（2）表中限制酶BamHⅠ和BglⅡ的識別序列不同，但兩者切割產生的黏性末端相同，都是GATC．
（3）在構建介導序列質粒載體時，選用EcoRⅠ和BamHⅠ切割質粒和介導序列得到的DNA兩端的黏性末端不同，可防止質粒與質粒、介導序列與介導序列之間進行連接，從而避免質粒和介導序列發(fā)生自身環(huán)化．
（4）啟動子是RNA聚合酶識別和結合的位點，能驅動基因轉錄出mRNA．
（5）由圖可知，重組的基因表達載體含有2個EcoRⅠ酶割位點，含有1個SalⅠ酶切位點，因此使用EcoRⅠ和SalⅠ酶切重組質�？梢缘玫�3種DNA片斷．
故答案為：
（1）引物  
（2）BamHⅠ和BglⅡ
（3）避免質粒和介導序列發(fā)生自身環(huán)化
（4）驅動目的基因轉錄出mRNA  
（5）3

點評 本題結合構建工程菌的部分過程圖解，考查基因工程的技術和原理，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能根據圖中和表中信息答題．需要注意的是第（5）題，考生可以將重組表達載體上的酶切位點標出，明確BamHⅠ和BglⅡ切割后的黏性末端能在DNA連接酶的作用下連接起來，但重組序列不能被BamHⅠ或BglⅡ酶割．