Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞。科研人員利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

(1)Rag2基因表達(dá)的場(chǎng)所最可能在___________(填寫(xiě)器官)

(2)步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到___________期時(shí)，可從___________分離出ES細(xì)胞。

(3)步驟③中，需要構(gòu)建含有基因Rag2的表達(dá)載體�？梢岳�用___________擴(kuò)增Rag2基因片段。用 HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有___________和___________的酶切位點(diǎn)。

(4)為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的______________________，用___________進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】骨髓或胸腺 囊胚 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) pcr 技術(shù) HindⅢ PstⅠ 蛋白質(zhì) Rag2蛋白的抗體

【解析】

圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的過(guò)程圖解，其中①表示核移植過(guò)程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程，③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞。

1、動(dòng)物核移植的概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。

2、胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱(chēng)ES或EK細(xì)胞，來(lái)源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）。

3、在基因工程中，目的基因和質(zhì)粒需要用同種限制酶進(jìn)行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒。

4、目的基因分子水平上的檢測(cè)：

①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)。

②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)。

③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

（1）Rag2基因表達(dá)的場(chǎng)所最可能在骨髓或胸腺。

（2）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)位于囊胚中，所以步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。

（3）步驟③中，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。基因工程中構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，若用HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段，則為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點(diǎn)。

（4）為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)（抗原），用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。