Question

5．利用生物工程技術，可從轉基因奶山羊乳汁中分離獲得人凝血因子IV，用于血友病的治療．請回答下列問題：
（1）根據(jù)凝血因子IV基因上游和下游的堿基序列，可用PCR技術獲取并擴增基因．構建該基因表達載體時，所用到的工具酶是限制性內切酶和DNA連接酶，該基因表達載體中，凝血因子Ⅳ基因的上游和下游分別是啟動子和終止子．
（2）將目的基因表達載體導入奶山羊受精卵的常用方法是顯微注射法．受體細胞選用受精卵的優(yōu)點是細胞大易操作、營養(yǎng)物質含量高和細胞全能性高．
（3）在體外胚胎培養(yǎng)時，應選用囊胚的滋養(yǎng)層細胞進行DNA分析，用于選擇雌性胚胎．此期的胚胎也適于胚胎分割移植，此技術的優(yōu)點是充分發(fā)揮雌性動物的生殖潛力（快速大量繁殖）．
（4）人凝血因子IV是一種胞外酶，該蛋白的加工是在內質網(wǎng)、高爾基體等細胞器上進行的．人凝血因子IV只在乳腺細胞合成的原因是基因的選擇性表達．

Answer 1

分析 1、啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質．
終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的尾端．
2、分泌蛋白的合成、加工和運輸過程：最初是在內質網(wǎng)上的核糖體中由氨基酸形成肽鏈，肽鏈進入內質網(wǎng)進行加工，形成有一定空間結構的蛋白質由囊泡包裹著到達高爾基體，高爾基體對其進行進一步加工，然后形成囊泡分泌到細胞外．
3、在做胚胎性別鑒定時，需要取囊胚的滋養(yǎng)層細胞做DNA分析，進行性別鑒定．

解答 解：（1）可以根據(jù)基因編碼序列兩端的部分堿基序列設計引物，用PCR技術進行體外大量擴增獲得目的基因．構建該基因表達載體時，需要限制酶內切酶切割目的基因和運載體，再用DNA連接酶鏈接，形成表達載體．啟動子是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質．終止子也是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的尾端．
（2）受體細胞是動物細胞，常用顯微注射法將目的基因導入受體細胞中．由于受精卵細胞大易操作、營養(yǎng)物質含量高、細胞全能性高，因此常被作為受體細胞選用．
（3）在做胚胎性別鑒定時，需要取囊胚的滋養(yǎng)層細胞做DNA分析，進行性別鑒定．此期的胚胎也適于胚胎分割移植，胚胎分割技術具有充分發(fā)揮雌性動物的生殖潛力（快速大量繁殖）的優(yōu)點．
（4）分泌蛋白在內質網(wǎng)上的核糖體上合成，進入內質網(wǎng)進行加工、分類、包裝，形成囊泡進入高爾基體，由高爾基體進行進一步加工，形成囊泡，運向細胞膜，由細胞膜分泌到細胞外．由于基因的選擇性表達，所以人凝血因子IV只在乳腺細胞合成．
故答案為：
（1）PCR   限制性內切酶和DNA連接酶    啟動子和終止子
（2）顯微注射法   細胞全能性高
（3）滋養(yǎng)層細胞   充分發(fā)揮雌性動物的生殖潛力（快速大量繁殖）
（4）內質網(wǎng)、高爾基體    基因的選擇性表達

點評 本題考查基因工程、細胞工程和胚胎工程等知識，要求考生識記基因工程的基本操作步驟；識記動物細胞培養(yǎng)的條件；識記胚胎工程的相關技術及操作，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱識記層次的考查．