Question

19．人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得．流程如下：

（1）htPA基因與載體構(gòu)建重組表達載體．檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術(shù)．
（2）為獲取更多的卵（母）細胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．采集的精子需要經(jīng)過獲能（處理），才具備受精能力．
（3）將重組表達載體導入受精卵常用的方法是顯微注射法．為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進行性別鑒定，一般采用SRY-PCR方法，選擇出現(xiàn)陰性反應的（填“陽性”、“陰性”）胚胎進行移植．利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細胞的全能性．
（4）若在轉(zhuǎn)ht-PA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．

Answer 1

分析 DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．

解答 解：（1）檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術(shù)，原理是堿基互補配對．
（2）對供體母羊注射促性腺激素可促使其超數(shù)排卵．采集的精子需要經(jīng)過獲能處理才具備受精能力．
（3）將目的基因?qū)�入受精卵的方法是顯微注射法，為獲得母羊，所以胚胎移植前需要進行性別鑒定，利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細胞的全能性．
（4）基因表達成功時可獲得目的基因的產(chǎn)物，既在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．
故答案為：
（1）DNA分子雜交（或核酸探針）
（2）超數(shù)排卵；   獲能（處理）
（3）顯微注射法     性別鑒定      陰性     全能性
（4）htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

點評 本題結(jié)合轉(zhuǎn)htPA基因母羊的培育過程圖，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各步驟中的相關(guān)細節(jié)，能結(jié)合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．