Question

11．內(nèi)皮素（ET）有強(qiáng)烈的血管收縮和促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖等作用，其功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯(lián)系．ETA是ET的主要受體，科研人員試圖通過構(gòu)建表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ETA基因在細(xì)胞中高效表達(dá)，為后期ETA的體外研究以及拮抗劑的篩選、活性評價(jià)等奠定基礎(chǔ)．其過程如圖所示，其過程如下（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaI的識別序列為C↓CCGGG，限制酶XhoI的識別序列為C↓TCGAG）．請分析回答：

（1）過程①需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄，過程③中限制酶XhoI切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開．與只使用XhoI相比較，使用XhoI和ApaI兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒和外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止（含目的基因的外源DNA片段和質(zhì)粒）自身環(huán)化．
（2）基因工程的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，其中氨芐青霉素抗性基因的作用是將含目的基因的細(xì)胞篩選出來（或重組DNA的鑒定和選作）．
（3）過程⑥中，若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱．
（4）利用SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是檢測ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
（5）人的皮膚黑色素細(xì)胞上有內(nèi)皮素的特異性受體，內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上的受體結(jié)合后，會刺激黑色素細(xì)胞的分化、增殖并激活絡(luò)氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加．利用注射EFA達(dá)到美白祛斑的效果，試解釋原因：ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞受體的結(jié)合抑制了黑色素的形成．

Answer 1

分析 分析題圖：1、2、3過程表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過程，4表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，5表示利用限制酶切割質(zhì)粒的過程，6表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程，7表示目的基因的檢測，以此分析答題．

解答 解：（1）圖中①是逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；限制酶能識別特定的脫氧核苷酸序列，并在特定脫氧核苷酸之間切斷磷酸二酯鍵；與只使用XhoI相比較，使用XhoI和ApaI兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒和外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止（含目的基因的外源DNA片段和質(zhì)粒）自身環(huán)化．
（2）基因工程的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建；氨芐青霉素抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，其作用是將含目的基因的細(xì)胞篩選出來（或重組DNA的鑒定和選作）．
（3）過程⑥中，若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱．
（4）利用SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，可以檢測ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
（5）ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合，抑制了內(nèi)皮素對黑色素細(xì)胞的增值和黑色素的形成，從而達(dá)到美容的目的．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄     磷酸二酯    （含目的基因的外源DNA片段和質(zhì)粒）自身環(huán)化
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建    將含目的基因的細(xì)胞篩選出來（或重組DNA的鑒定和選作）
（3）未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱
（4）檢測ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量
（5）ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞受體的結(jié)合抑制了黑色素的形成

點(diǎn)評 本題結(jié)合流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．