Question

【題目】噬菌體展示技術(shù)是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源基因隨噬菌體外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá)，同時(shí)，外源蛋白或多肽隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。利用該技術(shù)可以獲得單克隆抗體(最新技術(shù)）。請(qǐng)問(wèn)答下列問(wèn)題：

（1）傳統(tǒng)單克隆抗體的獲得需先對(duì)小鼠進(jìn)行_______處理，整個(gè)過(guò)程中涉及的現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)有________。

（2）外源DNA片段含_________個(gè)游離的磷酸。為了得到大量的外源DNA，可使用PCR技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增，合成引物________(填“需要”或“不需�！�)知道整個(gè)外源DNA序列，合成的引物間不能進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的原因是________________。

（3）噬菌體展示技術(shù)獲得的抗體還可用于定量檢測(cè)抗原，如雙抗體夾心法，具體原理如下圖所示：

分析上圖可知，固相抗體和酶標(biāo)抗體均能與抗原結(jié)合，這是由于不同抗體可與同一抗原表面的______結(jié)合。該檢測(cè)方法中，酶標(biāo)抗體的作用是__________，可通過(guò)測(cè)定產(chǎn)物量來(lái)推測(cè)抗原量。

（4）試說(shuō)說(shuō)噬菌體展示技術(shù)可能的局限性:_______________________。

Answer 1

【答案】 注射特定的抗原蛋白(免疫） 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合 2 不需要 它們的模板分別位于外源DNA的兩端，而兩端的模板序列并不能進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì) 不同部位 與待測(cè)抗原結(jié)合，酶催化檢測(cè)底物反應(yīng) 不能展示對(duì)噬菌體或宿主細(xì)胞有毒的蛋白質(zhì)，噬菌體的蛋白質(zhì)無(wú)法被內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等加工

【解析】試題本題以圖文的形式考查了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體的制備的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)圖、析圖能力及運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決問(wèn)題的能力。噬菌體展示技術(shù)是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源基因隨外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá)，同時(shí)，外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。

（1）傳統(tǒng)單克隆抗體的獲得需從小鼠脾臟獲取效應(yīng)B細(xì)胞前需對(duì)小鼠進(jìn)行注射特定抗原蛋白處理，整個(gè)過(guò)程中涉及的現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合。

（2）每個(gè)DNA分子的每條單鏈上各有一個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，因此外源DNA片段含2個(gè)游離的磷酸。一般情況下，我們需要大量的某一基因的片段時(shí)，我們?cè)诨�因的兩端分別設(shè)計(jì)引物（一段一條），然后在體外，采用PCR的方法，用引物進(jìn)行體外DNA復(fù)制，從而大量合成引物之間的基因。因此不需要知道整個(gè)外源DNA序列，只需要設(shè)計(jì)好引物，其余部分可通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則自動(dòng)完成。由于引物的模板分別位于外源DNA的兩端，而兩端的模板序列并不能進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，因此合成的引物間不能進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)。

（3）抗體與抗原的結(jié)合具有特異性，因此不同抗體可與同一抗原表面的不同部位結(jié)合。由于抗體具有特異性，因此該檢測(cè)方法中，酶標(biāo)抗體的作用是與待測(cè)抗原結(jié)合，酶催化檢測(cè)底物反應(yīng)，可通過(guò)測(cè)定產(chǎn)物量來(lái)推測(cè)抗原量。

（4）菌體展示技術(shù)可能的局限性：不能展示對(duì)噬菌體或宿主細(xì)胞有毒的蛋白質(zhì)，噬菌體的蛋白質(zhì)無(wú)法被內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等加工。