Question

【題目】反義寡脫氧核苷酸技術(shù)阻斷喉癌Hep-2細(xì)胞GLUT-1的表達(dá)，能抑制喉癌細(xì)胞的葡萄糖吸收。

（1）GLUT-1的加工與抗體類似，按順序?qū)懗雠cGLUT-1合成加工直接相關(guān)的細(xì)胞器___________。推測喉癌細(xì)胞吸收葡萄糖時，GLUT-1的功能是_________。

（2）反義寡脫氧核苷酸序列能夠與GLUT-1基因的mRNA結(jié)合，使mRNA不能與______________結(jié)合，抑制GLUT-1基因翻譯過程。反義寡脫氧核苷酸序列不能與其它正�；�因的序列相同，原因是___________________。

（3）某人從癌細(xì)胞的_____________文庫中獲取GLUT-1基因（有內(nèi)含子）。要獲得大量GLUT-1用于研究，將GLUT-1基因?qū)�入大腸桿菌中，大腸桿菌等原核細(xì)胞具有_______________________（至少寫兩點）等優(yōu)點。

（4）利用PCR技術(shù)擴增GLUT-1基因，需要_______（填：“1種”、“2種”或“多種”）引物，需要_______（填：“1個”、“2個”或“多個”）個引物。

Answer 1

【答案】核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體 運輸葡萄糖 核糖體 防止影響正�；�因的表達(dá) 基因組文庫 繁殖快、易培養(yǎng)、遺傳物質(zhì)少 2 多個

【解析】

反義寡脫氧核苷酸序列能夠與GLUT-1基因的mRNA結(jié)合，使mRNA不能與核糖體結(jié)合，影響翻譯過程，進(jìn)而影響基因的表達(dá)。cDNA文庫屬于部分基因文庫，小于基因組文庫。

（1）GLUT-1的加工與抗體類似，而抗體屬于分泌蛋白，在附著在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體中合成，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)初步加工并運輸?shù)礁郀柣�體，高爾基體對其進(jìn)一步加工和包裝，通過分泌小泡將其送到細(xì)胞膜處，通過胞吐出細(xì)胞，故與GLUT-1合成加工直接相關(guān)的細(xì)胞器核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體。根據(jù)“反義寡脫氧核苷酸技術(shù)阻斷喉癌Hep-2細(xì)胞GLUT-1的表達(dá)，能抑制喉癌細(xì)胞的葡萄糖吸收”，可推測GLUT-1可能是運輸葡萄糖的載體蛋白，功能為運輸作用。

（2）反義寡脫氧核苷酸序列能夠與GLUT-1基因的mRNA結(jié)合，使mRNA不能與核糖體結(jié)合，抑制GLUT-1基因翻譯過程。反義寡脫氧核苷酸序列不能與其它正�；�因的序列相同，這樣可防止影響正�；�因的表達(dá)。

（3）基因組文庫含有啟動子，以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA中既沒有啟動子，又無終止子和內(nèi)含子，故獲取GLUT-1基因（有內(nèi)含子）應(yīng)從基因組文庫中獲取。大腸桿菌具有繁殖快、易培養(yǎng)、遺傳物質(zhì)少等優(yōu)點，常用做基因工程中的受體細(xì)胞。

（4）由于DNA復(fù)制為半保留復(fù)制，而引物為單鏈DNA片段，所以由原來的母鏈為模板合成的兩個新DNA分子中，故利用PCR技術(shù)擴增GLUT-1基因時一般需要兩種引物，由于每次復(fù)制均需要引物，故需要多個引物。