Question

【題目】某種熒光蛋白（GFP）在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的首端，獲得了L1-GFP融合基因（簡稱為甲），并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如下，圖中E1~E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。

回答下列問題：

（1）據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P0時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是_________；使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證_____________和______________。

（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了________和_________過程。

（3）為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的_____________移入牛的去核的卵母細(xì)胞中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。

（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定。在鑒定時應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的____________（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。

Answer 1

【答案】E1和E4甲的完整甲與載體的正確連接轉(zhuǎn)錄翻譯細(xì)胞核核DNA

【解析】

根據(jù)題干信息和圖形分析，圖示為重組質(zhì)粒（基因表達(dá)載體P1），其結(jié)構(gòu)中含有啟動子、終止子、標(biāo)記基因（GFP基因）和目的基因（L1基因）；圖中顯示甲（了L1-GFP融合基因）兩側(cè)的限制酶分別是E1、E4，因此將甲插入質(zhì)粒P0需要用這兩種酶處理目的基因和質(zhì)粒。

（1）根據(jù)以上分析已知，為了保證甲的完整性，將甲插入質(zhì)粒P0時應(yīng)該使用的兩種限制酶是E1和E4，這兩種限制酶切割后漏出的末端是不相同的，這樣可以防止任意連接，以保證甲與載體的正確連接。

（2）若能觀察到綠色熒光，說明標(biāo)記基因已經(jīng)成功表達(dá)出了熒光蛋白，進(jìn)而證明了目的基因已經(jīng)表達(dá)，而基因的表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個過程。

（3）為獲得轉(zhuǎn)基因的動物，需要將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的細(xì)胞核取出，注入到該牛的去除細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，然后再進(jìn)行體外培養(yǎng)。

（4）進(jìn)行PCR技術(shù)時，需要以DNA為模板，脫氧核苷酸為原料，同時需要加入引物，所以在檢測甲是否存在于牛的不同組織細(xì)胞采用PCR技術(shù)鑒定時，要以核DNA為模板。