Question

【題目】如圖是利用羊來(lái)生產(chǎn)人抗凝血酶（AT）的基本流程．圖中ampR表示氨芐青霉素抗性基因，如tetR表示四環(huán)素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ為三種限制酶及酶切位點(diǎn)．據(jù)圖回答問(wèn)題：
（1）通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄人工合成的AT基因（填“有”或“無(wú)”）內(nèi)含子，可采用技術(shù)來(lái)擴(kuò)增獲得的AT基因．
（2）圖中將人AT基因插入到質(zhì)粒前，需要用限制酶同時(shí)切割載體和含AT基因的片段，篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌首先需要在含的培養(yǎng)基上進(jìn)行．
（3）重組質(zhì)粒上啟動(dòng)子的功能是 ． 過(guò)程①可采用的方法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入羊受精卵中，羊的早期胚胎發(fā)育至階段后通過(guò)過(guò)程②移植到代孕羊體內(nèi)．
（4）可采用技術(shù)從分子水平來(lái)檢測(cè)AT基因是否表達(dá)成功．

Answer 1

【答案】
（1）無(wú)；PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）
（2）HindⅢ和BamHI；氨芐青霉素
（3）驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄；顯微注射；桑椹胚或囊胚
（4）抗原一抗體雜交
【解析】解：（1）真核生物基因的編碼區(qū)包含外顯子和內(nèi)含子，但是翻譯的模板mRNA只是由外顯子轉(zhuǎn)錄而來(lái)，因此通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄人工合成的AT基因沒(méi)有內(nèi)含子，可采用PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)來(lái)擴(kuò)增獲得的AT基因．（2）由于質(zhì)粒中只含有兩種限制酶切點(diǎn)，因此圖中將人AT基因插入到質(zhì)粒前，需要用HindⅢ和BamHI限制酶同時(shí)切割載體和含AT基因的片段；質(zhì)粒中氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，用于檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，因此篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行．（3）重組質(zhì)粒上啟動(dòng)子的功能是驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄．過(guò)程①可采用顯微注射的方法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入羊受精卵中，羊的早期胚胎發(fā)育至桑椹胚或囊胚階段后通過(guò)過(guò)程②移植到代孕羊體內(nèi)．（4）可采用抗原一抗體雜交技術(shù)從分子水平來(lái)檢測(cè)AT基因是否表達(dá)成功． 所以答案是：（1）無(wú) PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）（2）HindⅢ和BamH I 氨芐青霉素 （3）驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄 顯微注射 桑椹胚或囊胚（4）抗原一抗體雜交
【考點(diǎn)精析】通過(guò)靈活運(yùn)用基因工程的原理及技術(shù)，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)即可以解答此題．