Question

【題目】來源于某種野生植物的A基因表達出的多肽對多種致病微生物具有殺滅作用，將A基因導入油菜可顯著提高油菜的抗病能力。

（1）下圖是含目的基因A的DNA分子，利用PCR技術擴增A基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成___________。PCR—般要經歷三十多次循環(huán)，在第3輪循環(huán)產物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段，這種DNA片段所占的比例為___________。

（2）通過SmaⅠ酶切割擴增后的DNA分子和質粒，利用___________酶連接切割后的DMA分子和質粒，將A基因插入質粒的啟動子和終止子之間，構建___________。

（3）利用農桿菌轉化法將A基因導入經___________形成的油菜愈傷組織細胞，在愈傷組織進一步培養(yǎng)過程中，MS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加質量濃度為0.15mg/L的奈乙酸（NAA），目的是有利于________的分化。

（4）經檢測，轉入完整A基因的某些植物不能正確表達多肽，從A基因與質粒連接形成重組質粒的角度分析，最可能的原因是_________________________________。

Answer 1

【答案】 引物 1/4 DNA連接 （基因）表達載體 脫分化（去分化） 根 部分A基因與質粒反向連接

【解析】試題分析：根據(jù)題干信息可知，本題涉及到基因工程的基本步驟的考查，其中A基因為目的基因，表達產物可以控制顯著提高油菜的抗病能力；常用PCR技術擴增目的基因；基因工程常用的工具酶有限制酶和DNA連接酶；將目的基因導入植物細胞常用農桿菌轉化法。

（1）在PCR技術擴增目的基因的過程中，要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物；第3輪循環(huán)獲得8個DNA片段，其中兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段有2個，因此在第3輪循環(huán)產物中兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段所占的比例為1/4。

（2）在構建基因表達載體時，應該先用限制酶切割含目的基因的DNA分子和質粒，再用DNA連接切割后的DMA分子和質粒，連接成重組質粒。

（3）油菜的愈傷組織細胞是經過脫分化形成的；在愈傷組織進一步培養(yǎng)過程中，MS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加質量濃度為0.15mg/L的奈乙酸（NAA），目的是有利于根的分化。

（4）轉入完整A基因的某些植物不能正確表達多肽，從A基因與質粒連接形成重組質粒的角度分析，最可能的原因是部分A基因與質粒反向連接。