4.回答下列有關(guān)基因表達(dá)和基因工程問題.
(1)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列,圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列.現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶,它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C
↓CGG、G
↓GATCC、
↓GATC、CCC
↓GGG.下列分析中正確的是CD(多選)
A.若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段,能產(chǎn)生2個(gè)平滑末端
B.若用限制酶MspⅠ酶切含目的基因的DNA片段,則獲得的最長的DNA片段長度為788bp
C.若需將目的基因D導(dǎo)入圖2中的質(zhì)粒,應(yīng)選擇限制酶是BamHⅠ
D.為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌,培養(yǎng)基上需分別添加抗生素B和抗生素A
(2)假設(shè)某基因的右側(cè)序列是AAGCTTGAC∥TTCGAACTG,應(yīng)選擇下表中的3酶(填數(shù)字序號(hào))作為內(nèi)切酶.
(3)請(qǐng)?jiān)趫D3方框內(nèi)畫出上題酶切割后產(chǎn)生的兩個(gè)末端的堿基序列.
圖4甲是某目的基因(4.0kb,1kb=1000對(duì)堿基)與大腸桿菌pUC18質(zhì)粒(2.7kb)重組的示意圖.圖中Ap′是抗氨芐青霉素基因,lacZ是顯色基因,其上的EcoRI識(shí)別位點(diǎn)位于目的基因插入位點(diǎn)的右側(cè),其控制合成的物質(zhì)能使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色.(圖乙中深色圓點(diǎn)即為藍(lán)色菌落)
(4)圖乙的培養(yǎng)基中含有氨芐青霉素,請(qǐng)判斷圖乙中所出現(xiàn)的白色和藍(lán)色兩種菌落中,何種會(huì)含有重組質(zhì)粒?白色.
(5)現(xiàn)用EcoRI酶切質(zhì)粒,酶切后進(jìn)行電泳觀察.有人說,只有出現(xiàn)長度為3.0kb和3.7kb的片段,才可以判斷該質(zhì)粒已與目的基因重組成功(重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點(diǎn)與EcoRI的識(shí)別位之間的堿基對(duì)忽略不計(jì)).你如何評(píng)價(jià)之?不對(duì),因?yàn)檫可能出現(xiàn)1.0kb和5.7kb的結(jié)果.