Question

4．為了解基因結(jié)構(gòu)，通常選取一特定長度的線性DNA分子，先用一種限制酶切割，通過電泳技術(shù)將單酶水解片段分離，計(jì)算相對大��；然后再用另一種酶對單酶水解片段進(jìn)行降解，分析片斷大�。�下表是某小組進(jìn)行的相關(guān)實(shí)驗(yàn)．

已知一線性DNA序列共有5000bp（bp為堿基對）	第一步水解	產(chǎn)物（單位bp）	第二步水解	產(chǎn)物（單位bp）
	A酶切割	2100	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用B酶切割	1900   200
		1400		800    600
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2500	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用A酶切割	1900   600
		1300		800    500
		1200		1000   200
	經(jīng)A酶和B酶同時(shí)切割	1900    1000    800    600    500    200

（1）該實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)出限制酶的作用特點(diǎn)是能夠特異性識(shí)別DNA分子的特定核苷酸序列，并且在特定部位切割．
（2）由實(shí)驗(yàn)可知，在這段已知序列上，A酶與B酶的識(shí)別序列分別為3個(gè)和2個(gè)．
（3）根據(jù)表中數(shù)據(jù)，請?jiān)趫D中標(biāo)出相應(yīng)限制性酶的酶切位點(diǎn)并注明相關(guān)片斷的大小．
．
（4）已知BamHⅠ與BglⅡ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如右圖所示，用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數(shù)個(gè)BamHⅠ和BglⅡ識(shí)別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干循環(huán)后  和序列明顯增多．該過程中DNA連接酶催化磷酸二酯鍵的形成．
（5）一個(gè)基因表達(dá)載體的組成除了目的基因外，還必須有啟動(dòng)子、終止子以及標(biāo)記基因．

Answer 1

分析 限制性核酸內(nèi)切酶是可以識(shí)別DNA的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶，簡稱限制酶．由表格分析可知A酶切割后有4段產(chǎn)物，說明酶A有3個(gè)切割位點(diǎn)；B酶切割后有3段產(chǎn)物，說明酶B有2個(gè)切割位點(diǎn)．限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA兩條鏈分別切開時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端；限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線將DNA切開時(shí)，產(chǎn)生的是平末端．

解答 解：（1）限制酶的作用特點(diǎn)是能夠特異性識(shí)別DNA分子的特定核苷酸序列，并且在特定部位切割．
（2）單獨(dú)用A酶切割后形成4個(gè)片段，說明有3個(gè)A酶識(shí)別位點(diǎn)；單獨(dú)用B酶切割后形成3個(gè)片段，說明有2個(gè)B酶切割位點(diǎn)．
（3）由表中酶切割后片段長度可知，1900+600=2500，800+500=1300，1000+200=1200，所以連接如圖所示．

（4）巳知BamHI與BglII的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如圖2所示．用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數(shù)個(gè)BamHⅠ和BglⅡ識(shí)別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干循環(huán)后和序列明顯增多．DNA連接酶催化形成的是磷酸二酯鍵．
（5）一個(gè)基因表達(dá)載體的組成除了目的基因外，還必須有啟動(dòng)子、終止子以及標(biāo)記基因．
故答案為：
（1）能夠特異性識(shí)別DNA分子的特定核苷酸序列，并且在特定部位切割
（2）3     2
（3）
（4） 磷酸二酯鍵
（5）啟動(dòng)子 終止子

點(diǎn)評 本題結(jié)合圖表，考查基因工程的原理及技術(shù)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具及操作步驟，重點(diǎn)考查要求理解和掌握限制酶和DNA連接酶的作用部位和作用對象，能結(jié)合表中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．