Question

1．大腸桿菌是寄生于人和動物腸道中的細菌，是一種常用的生物學(xué)實驗材料，其代謝產(chǎn)物能與染料伊紅美藍反應(yīng)，使菌落呈黑色．
（1）如表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方．

成分	含量
蛋白胨	10.0g
乳糖	5.0g
蔗糖	5.0g
K2HPO4	2.0g
顯色劑	0.2g
瓊脂	12.0g
將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL

根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于鑒別（填“選擇”或“鑒別”）培養(yǎng)基，若要分離能分解尿素的細菌需將培養(yǎng)基中蛋白胨換成尿素，若要鑒定分解尿素的細菌還需將伊紅•美藍換成酚紅指示劑．
（2）培養(yǎng)大腸桿菌時，常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．
（3）培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前通常需要檢測培養(yǎng)基是否被污染．對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生．對已使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散．
（4）現(xiàn)有一升水樣，用無菌吸管吸取1mL水樣至盛有9mL無菌水的試管中，依次稀釋10³稀釋度．各取0.1mL已稀釋10³倍的水樣分別接種到三個培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為5.6×10⁸．
（5）為檢測嚴重污染水體中大腸桿菌數(shù)量，將水樣適當稀釋后，取樣涂布在上述平板培養(yǎng)基中，應(yīng)選擇顏色為黑色的菌落進行計數(shù)．該方法是通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)，其原理是當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌．

Answer 1

分析 1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．
2、鑒別、培養(yǎng)大腸桿菌可使用伊紅-美藍培養(yǎng)基，菌落呈黑色或紫黑色有金屬光澤．
3、由于細菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，PH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅．

解答 解：（1）分析培養(yǎng)基成分可知，培養(yǎng)基中加入顯色劑，因此根據(jù)用途可以判斷，該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基；培養(yǎng)基中的氮源為蛋白胨，若要分離能分解尿素的細菌需將培養(yǎng)基中蛋白胨換成尿素，若要鑒定分解尿素的細菌還需將伊紅•美藍換成酚紅指示劑．
（2）培養(yǎng)大腸桿菌時，常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．
（3）培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前通常需要檢測培養(yǎng)基是否被污染．對于固體培養(yǎng)基應(yīng)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生．對已使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散．
（4）根據(jù)題干提供的數(shù)據(jù)，每升原水樣中大腸桿菌數(shù)=（55+56+57）÷3÷0.1×10³×10³=5.6×10⁸．
（5）根據(jù)題意可知，“大腸桿菌代謝產(chǎn)物能與染料伊紅美藍反應(yīng)，使菌落呈黑色”，因此為檢測嚴重污染水體中大腸桿菌數(shù)量，將水樣適當稀釋后，取樣涂布在上述平板培養(yǎng)基中，應(yīng)選擇顏色為黑色的菌落進行計數(shù)．該方法是通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)，其原理是當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌．
故答案為：
（1）鑒別       蛋白胨      尿素        酚紅指示劑
（2）平板劃線法和稀釋涂布平板法
（3）將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生   滅菌
（4）5.6×10⁸
（5）黑色   當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌

點評 本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生能夠根據(jù)實驗原理補充實驗步驟，識記培養(yǎng)基的主要成分，掌握微生物分離與純化的一般方法．