Question

6．草魚病毒性出血病是由草魚呼吸孤病毒（GCRV）引起的，目前尚未找到防治藥物．如圖是通過基因工程方法將PV7雙基因與某質粒連接，并通過草魚攻毒實驗檢測免疫保護效果的過程示意圖．圖中P10和PH為啟動子，箭頭表示轉錄方向．PV7₁和PV7₂為GCRV外殼蛋白基因（DNA片段）．請回答下列問題：

草魚病毒性出血病核酸疫苗實驗魚的死亡率和免疫保護率記錄表

組別	疫苗注射量	實驗魚數(shù)	死亡魚數(shù)	死亡率	免疫保護率
1	10μg	20尾	0尾	0	100%
2	30μg	20尾	0尾	0	100%
3	60μg	20尾	1尾	5%	95%
空載體	30μg	20尾	6尾	30%	70%
對照	0	20尾	20尾	100%	0

（1）制備草魚病毒性出血病核酸疫苗，獲取大量PV7雙基因時可采用PCR技術進行擴增，該技術除需要原料、模板、引物外，還必須用熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq）酶．PCR一般要經(jīng)歷三十次以上的循環(huán)，每次循環(huán)包括變性、復性和延伸三個階段，其中變性是指高溫（或90-95℃、受熱）條件下，DNA分子解旋（為單鏈）的過程．
（2）使用不同的限制酶切割PV7₁和PV7₂基因，是為了防止連接的位置錯誤，用不同限制酶先后兩次切割質粒，是為了防止質粒自身環(huán)化，有利于提高核酸疫苗構建的成功率．
（3）攻毒實驗檢測是指將不同濃度的核酸疫苗導入草魚體內，通過轉錄和翻譯產(chǎn)生草魚呼腸孤病毒外殼蛋白，使草魚生成抗體和記憶細胞，同時給草魚注入相同濃度的GCRV，我，統(tǒng)計草魚免疫保護率，實驗結果說明核酸疫苗起到了保護草魚、預防草魚病毒性出血病的作用．導入空載體（普通質粒）的草魚免疫保護率達到70%，但草魚體內并未檢測到抗體水平的明顯增加，可能的原因是導入草魚體內的空載體（普通質粒）能提高草魚的非特異性免疫能力．核酸疫苗注射后，科學家發(fā)現(xiàn)PV7雙基因在啟動子的驅動下持續(xù)表達，至第49天核酸疫苗仍沒有被降解，仍能檢測到PV7雙基因的轉錄．綜上所述，與常規(guī)基因工程生產(chǎn)的蛋白質疫苗相比，核酸疫苗所具備的優(yōu)點有抗原性強、保護時間長、安全性好、制備和運輸方便．

Answer 1

分析 析題圖：圖中P10和PH為啟動子，箭頭表示轉錄方向．PV7₁和PV7₂為GCRV外殼蛋白基因（DNA片段）．
分析表格：組別5是對照組，與對照組相比，注射疫苗量在10ug～60ug時，草魚病毒性出血病核酸疫苗實驗魚的死亡率都幾乎為0，即免疫保護率幾乎均為100%．組別4注射導入普通質粒的草魚免疫保護率達到了70%．

解答 解：（1）PCR技術是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，PCR擴增目的基因時，除需要原料、模板、引物外，還需熱穩(wěn)定DNA聚合酶，每次循環(huán)需經(jīng)過模板在高溫（或90-95℃、受熱）條件下變性，解旋為單鏈、復性（引物與DNA單鏈結合），熱穩(wěn)定DNA聚合酶在適當溫度下催化DNA鏈延伸合成三步．
（2）啟動子P10能啟動PV7₁基因的轉錄，PH能啟動PV7₂基因的轉錄，用不同的限制酶切割質粒PV7₁、PV7₂基因是為了防止連接位置錯誤，用不同的限制酶先后兩次切割質粒，是為了防止質粒向身環(huán)化，還有利于提高核酸疫苗構建的成功率．
（3）實驗結果說明核酸疫苗起到了保護草魚、預防草負病毒件出血病的作用，導入空載體（普通質粒），草魚體內并未檢測到抗體水平的明顯增加，可能的原因是空載體（普通質粒）能提高草魚的非特異性免疫能力，所以免疫保護率提高．與常規(guī)基因工程生產(chǎn)的蛋白質疫苗相比，核酸疫苗具有抗原性強、保護吋問長、安全性好、制備和運輸方便等優(yōu)點．
故答案為：
（1）引物          熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq）  高溫（或90-95℃、受熱）   解旋（為單鏈）
（2）連接的位置錯誤       質粒自身環(huán)化
（3）核酸疫苗起到了保護草魚、預防草魚病毒性出血病的作用   導入草魚體內的空載體（普通質粒）能提高草魚的非特異性免疫能力   抗原性強、保護時間長、安全性好、制備和運輸方便

點評 本題結合圖標，考查基因工程和免疫的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)；識記免疫調節(jié)的具體過程，能結合圖中信息準確答題，屬于考綱理解和應用層次的考查．