Question

10．癌胚抗原（CEA）是某些癌細胞表面產(chǎn)生的一種糖蛋白，臨床上通過制備CEA的單克隆抗體來診斷癌癥．回答下列問題．
（1）一般不直接用單個的B淋巴細胞培養(yǎng)形成細胞群的辦法來生產(chǎn)單克隆抗體．原因是B淋巴細胞不能無限增殖．
（2）制備CEA的單克隆抗體時，給小鼠注射的CEA相當于抗原，能使小鼠產(chǎn)生免疫反應．
（3）雜交瘤細胞的擴大培養(yǎng)，既可在體外培養(yǎng)，也可注射到小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)．體內(nèi)培養(yǎng)與體外培養(yǎng)相比，其優(yōu)點是無需提供營養(yǎng)物質(zhì)以及無菌環(huán)境，操作簡便．
（4）已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷．淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖．鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得融合細胞（一般只考慮細胞兩兩融合），并生產(chǎn)單克隆抗體．請回答：
①試管中除融合的雜種細胞外，還有2種融合細胞．
②設(shè)計一方法（不考慮機械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細胞，并說原理．
方法：用添加氨基嘌呤的培養(yǎng)液培養(yǎng)經(jīng)融合誘導后的細胞，收集能增殖的細胞．
原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及彼此融合的骨髓瘤細胞就不能增殖，（B淋巴細胞及彼此融合的B淋巴細胞也不能增殖，）但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞中可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖．．

Answer 1

分析 1、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．
2、人淋巴細胞和鼠骨髓瘤細胞混合培養(yǎng)，只考慮細胞兩兩融合，有三種融合細胞，即淋巴細胞自身融合形成的細胞、骨髓瘤細胞自身融合形成的細胞、雜交瘤細胞．
3、為了篩選出雜交瘤細胞，除去其他細胞，可向培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，使D合成途徑阻斷，僅有該合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的瘤細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖．

解答 解：（1）由于B淋巴細胞不能無限增殖，因此一般不直接用單個的B淋巴細胞培養(yǎng)形成細胞群．
（2）制備CEA的單克隆抗體時，給小鼠注射的CEA相當于抗原，能使小鼠產(chǎn)生免疫反應，產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細胞．
（3）雜交瘤細胞的擴大培養(yǎng)，既可在體外培養(yǎng)，也可體內(nèi)培養(yǎng)，即注射到小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)．體內(nèi)培養(yǎng)與體外培養(yǎng)相比，其優(yōu)點是 無需提供營養(yǎng)物質(zhì)以及無菌環(huán)境，操作簡便．
（4）①骨髓瘤細胞和B淋巴細胞融合形成3種雜種細胞，即B淋巴細胞自身融合的細胞、骨髓瘤細胞自身融合的細胞、雜交瘤細胞．
②從培養(yǎng)液中分離出雜種細胞，分析回答：
方法：在培養(yǎng)液中添加入氨基蝶呤再收集增殖的細胞．
原理：加入該物質(zhì)后，使D合成途徑阻斷，僅有該合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的瘤細胞細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖．
故答案為：
（1）B淋巴細胞不能無限增殖
（2）抗原
（3）腹腔      無需提供營養(yǎng)物質(zhì)以及無菌環(huán)境，操作簡便
（4）①2      
②方法：添加氨基嘌呤
原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及彼此融合的骨髓瘤細胞就不能增殖，（B淋巴細胞及彼此融合的B淋巴細胞也不能增殖，）但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞中可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖．

點評 本題結(jié)合單克隆抗體制備的相關(guān)知識，考查單克隆抗體制備的原理及具體過程，意在考查學生提取信息和分析問題的能力，學生需要能結(jié)合所學的知識準確答題，屬于考綱識記層次的考查．